牛膝矿物元素含量分析及其多糖成分的提取和免疫学活性的研究

牛膝始载于《神农本草经》,种植和药用历史悠久。牛膝类药材具有多种功效,故在临床上得到广泛应用。近二十年来,对其药用成分的研究取得很大发展,不断有新的化学成分被发现和报道并且药理作用研究也日趋深入。本研究着重探讨牛膝类药材的矿物元素、多糖成分的提取方法及其生物学活性,为牛膝类药材的质量控制以及在畜禽业的应用提供一定的参考和依据。试验分为以下五个部分: 试验一、不同品种牛膝生药材12种元素的测定采用ICP-MS、AFS以及FAAS法共测定牛膝中Zn、Mn、K、Fe、Ca、Cu、Co、Sr、Pb、As、Hg、Cd 12种矿物元素的含量。结果,以上三种方法的相对标准偏差(RSD)均小于5%,加标回收率范围在88.23%～102.98%之间,不同品种牛膝生药材的相应元素含量之间多数存在显著或极显著差异。表明测定方法准确可靠,牛膝品种不同,其元素含量差异也较大,富含多种人和动物所需的矿物元素,同时也存在某些重金属元素超标现象。 试验二、不同提取方法对川牛膝多糖提取率的影响通过热回流、超声、酶解超声3种方法提取RCP,电镜扫描观察经过以上方法提取后川牛膝药渣表面结构的改变情况。结果,热回流法、超声法和酶解超声法所得RCP的提取率依次为8.9%、20.81%和31.13%,提取率高低与药渣表面结构的改变有直接关系。 试验三、酶解超声法提取川牛膝多糖的正交试验研究采用正交试验法确定了RCP酶法提取和超声提取的最佳工艺。纤维素酶预处理的最佳条件:酶解时间为1 h、酶的用量为15 U/g、pH值为5、酶解温度为50℃,超声提取的最佳条件:样品粒度为20目、料液比(W/V)为1:40、超声时间为20 min。 试验四、牛膝多糖对环磷酰胺致小鼠免疫抑制的影响采用Cy制作小鼠免疫抑制模型,然后给以不同剂量ABPS连续治疗10 d。结果,与Cy对照组相比,正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔注射ABPS后,胸腺指数、脾指数、白细胞数以及CD4+/CD8+均明显升高,并呈现剂量-效应关系。这提示ABPS能对抗Cy致小鼠的免疫抑制,并能增强正常小鼠的免疫功能。 试验五、牛膝多糖对肉仔鸡球虫免疫的影响10日龄雏鸡免疫接种柔嫩艾美耳球虫活卵囊(2×103个/鸡),并且于11、14和17日龄分别肌肉注射ABPS(剂量分别为200、100、50mg/kg b.w.),第18 d,每只鸡经口给以5×104个柔嫩艾美耳球虫活卵囊。结果表明,ABPS可以一定程度地抑制肉仔鸡因球虫感染而引起的体重减轻,并能减轻盲肠病变,减少粪便卵囊排出量,增强肉仔鸡免疫水平,ABPS以高、中剂量(200、100 mg/kg b.w.)效果为佳,这提示ABPS具有作为免疫激活剂的潜力,可用于提高肉仔鸡免疫水平。