海湾扇贝分子标记的研究及应用

本文以海湾扇贝4个养殖群体为研究对象，采用随机引物多态性DNA（RAPD）技术进行了群体遗传学研究，并尝试使用4个群体中代表个体的内转录间隔区（ITS）序列比对分析结果作为参考；另外，本文还运用RAPD技术对人工异体交配的2个海湾扇贝家系的杂交成功率进行了分析，均获得成功证实，并评估了两个家系构建遗传连锁图谱的潜力。主要结果如下： 1．采用20条随机引物对4个群体80个个体（每个群体20个个体）进行了RAPD群体遗传多样性分析，共扩增出132个位点，片段大小在230-2800bp之间，平均每条引物的扩增带数是6.6条。4个群体的多态位点比例分别为浙江31.82%、加拿大29.55%、墨西哥湾扇贝31.82%、美国二代28.79%；平均杂合度分别为浙江0.1078、加拿大0.1134、墨西哥湾扇贝0.1197、美国二代0.0966。从遗传距离分析，浙江群体与加拿大群体较为接近，两者间的遗传距离为0.0319，而墨西哥湾扇贝群体与美国二代群体较为接近，两者间的遗传距离为0.0368。4个群体间的遗传分化系数Gst为0.1892，若将这4个群体看作一个总群体，则总群体的遗传变异中有18.92%是由4群体间的基因差异产生的。 2．测得4个群体代表个体的ITS部分序列，比对蜗牛A. rufus的5.8S序列确定其ITS1与ITS2区域。用于比较的序列长约350bp，观测一级结构，加拿大、墨西哥湾扇贝和美国二代个体的ITS1和ITS2序列几乎完全相同，而浙江个体则具有较多的插入位点与片段；4个个体平均G+C含量46.8%,其中浙江个体为48.3%，其它3个个体均为46.2%左右；转换颠换比与遗传距离主要存在于浙江个体与其它3个个体之间，分别为0.8和0.07左右；以栉孔扇贝作外群构建的分子系统树表明：浙江群体已产生了一定的分化。 3．在海湾扇贝Pb-Pa与Y1-P0家系中，分别筛选出12和10条引物，其扩增出的产物在双亲中呈现多态的片段。Pb-Pa家系中，12条引物扩增出的122条片段内有37条（30.3%）在亲本中呈多态性，根据卡方（P>0.05）检验，其中26条（16条来自母本，10条来自父本）标记为1：1分离；Y1-P0家系中，10条引物扩增出的95条片段内有32条（33.7%）在亲本中呈多态性，卡方检验显示其中22条（10条来自母本，12条来自父本）标记为1：1分离，表明2个家系在连锁图谱构建方面均有较好的应用价值，相比之下，Y1-P0家系可能更适合作为作图群体。根据亲本特异性分子标记在子代中的重现情况判断，每个待检的杂交家系F1个体均出现了双亲的特异性标记，证明2个家系的杂交均获得成功且成功率均为100%。