黄连碱体外抗炎作用及其机制研究

目的：观察黄连碱(Coptisine)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子NO、TNF-a和IL-1B的作用以及对p-ERK1/2、IκBα和iNOS蛋白表达的影响,探讨黄连碱体外抗炎作用及其机制。 方法：用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞,建立细胞炎症反应模型： (1)选择一氧化氮(NO)为指标,筛选黄连中五个主要成分的抗炎活性； (2) Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂(SunBioTM)检测黄连碱对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响； (3) Griess法检测细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量； (4) ELISA法检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-1B(IL-1B)含量； (5) Western Blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκBα和iNOS蛋白的表达。 结果：(1)黄连五个主要成分中小檗碱、黄连碱和巴马汀都能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的释放(p<0.05),并且小檗碱、黄连碱呈现出剂量依赖性； (2)黄连碱50μM组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率明显高于空白对照组(p<0.05),但0.1μM组、1μM组、10μM组、20μM组和30μM组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率没有明显的差异,和空白对照组相比(p>0.05)； (3)黄连碱10μM组、30μM组NO释放量均明显低于LPS组(p<0.05),其释放量随着剂量的增加而减少,但1μM组NO的释放量与LPS组比较无显著性差异(p>0.05),BAY11-7082组NO释放量明显低于LPS组(p<0.05)； (4)黄连碱1μM组、10gM组和30μM组TNF-a、IL-1β释放量均明显低于LPS组(p<0.05),其释放量随着剂量的增加而减少,BAY11-7082组TNF-a和IL-1B释放量明显低于LPS组(p<0.05)； (5)黄连碱30gM组和10gM组p-ERK1/2蛋白表达均明显低于LPS组(p<0.05),其表达量随着剂量的增加而减少,但1gM组与LPS组比较无显著性差异(p>0.05)；PD98059组p-ERK1/2蛋白表达明显低于LPS组(p<0.05)。 (6)黄连碱30μM组、10μM组和BAY11-7082组IκBα蛋白表达与LPS组比较均有显著性差异(p<0.05),但黄连碱1μM组和LPS组比较无显著性差异(p>0.05)；空白对照组RAW264.7巨噬细胞IκBα蛋白表达最高；LPS组IκBα蛋白表达最低,与空白对照组比较有显著性差异(p<0.05)； (7)黄连碱30μM组、10μM组和1μM组iNOS蛋白表达均明显低于LPS组(p<0.05),其表达量随着剂量的增加而减少；BAY11-7082组iNOS蛋白表达明显低于LPS组(p<0.05)。 结论：(1)黄连五个主要成分中小檗碱、黄连碱和巴马汀都能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的释放,它们的抗炎活性较好。 (2)黄连碱呈剂量依赖性抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子NO、TNF-a和IL-1β的释放,具有体外抗炎作用。 (3)黄连碱抗炎作用机制与其下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平,减少IκBα蛋白磷酸化降解和抑制iNOS蛋白表达等环节有关。