我国几种木本植物植原体的分子检测与鉴定

论文主要包括泡桐丛枝病和枣疯病植原体的分子检测、我国几种木本植物植原体的比较鉴定和泡桐丛枝病染色质外DNA分析三方面研究内容。 本研究首次对野生酸枣上发生的疯病进行了田间发病率调查，并应用合成的植原体通用引物，通过PCR及nested-PCR技术分别检测了野生酸枣和栽培大枣、几个抗枣疯病的枣树品种、郑州脱毒枣树组培苗和本实验室的脱毒泡桐组培苗（种苗），并研制了PCR快速检测试剂盒。结果显示，枣疯病病区的野生酸枣疯病发病很普遍，野生酸枣和嫁接枣树的无症带菌率高达10～35％；河北省抗病枣树品种中壶瓶枣和蛤蟆枣对枣疯病植原体的生长和繁殖有抑制作用；郑州送检的两批脱毒枣树组培苗中第一批的4个样品均有植原体病菌检出，第二批的10个样品均未检测到植原体病菌，本实验室6个脱毒组培苗无性系检测均未携带病菌。实验证明检测试剂盒能成功用于植原体检测，并使其更加简便、快速。 通过对桑萎缩病(MDD)、枣疯病（JWB）、酸枣丛枝病(WJWB)、泡桐丛枝病(PaWB)和苦楝丛枝病（CWB）植原体16SrDNA、23SrDNA和 核糖体蛋白（rp）基因的PCR扩增、异源双链迁移率分析（HMA）、16SrDNA PCR产物的限制性片段多态性分析（RFLP）以及植原体16SrDNA和rp基因的克隆和序列分析等比较研究，建立了一种快速确定未知植原体种类和分类地位的分子鉴别与鉴定优化程序；此程序可对田间采集的各种植物植原体样品直接进行快速鉴定和鉴别。根据16SrDNA序列分析和比较，首次将我国发生的苦楝丛枝病和国槐丛枝病（SWB）进行了鉴定和归类，CWB为翠菊黄化组；SWB为榆树黄化组成员。野生酸枣丛枝病和枣疯病植原体的16SrDNA序列和rp基因序列比较分析证明二者是同一种植物植原体侵染枣属的不同植物。 应用感染植原体的泡桐组培苗提取和分离植原体，通过植原体DNA的提取与纯化以及琼脂糖电泳和DIG探针杂交等实验，发现泡桐丛枝病植原体染色质外DNA可能有6条，分子量大小分别为8kb、6kb、3.5kb、2.4kb、2.2kb和1.8kb左右，为下一步深入开展泡桐丛枝病染色质外DNA克隆和其功能基因的分析打下了基础。