福寿螺多糖的分离纯化及其生物活性研究

目的:为深入研究动物多糖的药用价值,对福寿螺多糖进行分离提纯、结构鉴定和生物活性的研究。 方法: 1.通过热水浸提醇沉法提取出福寿螺粗多糖,在单因素分析（提取时间、提取次数、料液比、提取温度）的基础上进行L93～4正交分析,优化提取条件。 2.福寿螺粗多糖经过除蛋白、去杂质、纤维素离子交换柱（DEAE-52）和葡聚糖凝胶柱（SephadexG-200）柱纯化,通过紫外光谱分析法（UV）和高效液相色谱（HPLC）法分析多糖纯度。 3.结合HPLC、气相色谱（GC）、红外光谱（IR）、薄层色谱（TLC）等方法和化学分析法初步鉴定多糖的一级结构及部分理化性质。 4.通过体外抗氧化,体外对DNA的保护作用和体内小鼠免疫抑制模型的免疫功能试验,分析多糖的抗氧化和提高免疫力等活性。 结果: 1.正交试验结果表明,多糖提取的最佳工艺为:温度为90℃,固液比为1:90,时间为2h。采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量,最终测得福寿螺粗多糖总糖含量为39.88%。 2.使用DEAE-52离子交换柱和葡聚糖凝胶sephadexG-200柱对福寿螺粗多糖进行分离纯化,得到ASPS-Ⅰa和ASPS-Ⅱa两种多糖组分。经紫外光谱分析,在260nm和280 nm均无核酸和蛋白质吸收峰。经HPLC检测,ASPS-Ⅰa有一个吸收峰,说明ASPS-Ⅰa为均一多糖,可对其进行组成和结构分析。 3.ASPS-Ⅰa通过薄层层析法、红外光谱仪、高效液相色谱仪和气相色谱仪分析,结果表明ASPS-Ⅰa具有多糖的特征吸收峰、单由葡萄糖组成、主链以α-吡喃糖苷键连接为主的多糖。 4.体外抗氧化实验表明,福寿螺多糖具有较好的抗氧化作用,表现为:在多糖浓度为3.0 mg/mL时对羟自由基和对O2-的最高清除率分别达到75.07%和42.41%,在多糖浓度为5 mg/mL,对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制率可达到56.7%,抗肝组织自发性脂质过氧化作用抑制率可达到67.33%。福寿螺多糖对由自由基引起的DNA链和DNA碱基损伤还具有保护作用。体内外免疫试验表明福寿螺多糖能够提高巨噬细胞吞噬能力,增加脾脏指数,增强小鼠体内相关酶活性,从各方面提高小鼠的免疫活性。 结论:采用水提醇沉法提取福寿螺多糖,获得最佳提取工艺。经纯化得到组分相对均一,主链以α-吡喃糖苷键连接为主,由葡萄糖单一组成的多糖;福寿螺多糖具有较好的抗氧化和增强免疫活性等作用。