补中益气汤“益气升阳”配伍治疗脾虚泄泻大鼠的作用机制研究

目的：补中益气汤出自李东垣《脾胃论》,为益气升阳法代表方,是临床上治疗脾虚泄泻证的常用处方。本实验基于病理组织及营养物质吸收的角度,复制脾虚泄泻证动物模型,探讨脾虚泄泻的发生及其发生葡萄糖吸收障碍可能的作用机制；并通过补中益气汤“益气升阳”各配比组方进行干预,明确补中益气汤中益气升阳配比“黄芪-升麻、柴胡”的最佳用量。通过实验研究挖掘其科学内涵,为临床医家运用该方起指导作用。方法：1.补中益气汤益气升阳配比组方对脾虚泄泻大鼠的影响通过多因素法“五味偏食+游泳力竭+控制饮食”建立脾虚泄泻大鼠模型,造模完成后,随机分成补中益气汤组、补中益气汤倍“升麻-柴胡”组及补中益气汤去“升麻-柴胡”组,分别予以相对应的药物进行干预,考察大鼠体重、宏观积分、胸腺指数及脾脏指数。2.补中益气汤益气升阳配比组方对脾虚泄泻大鼠小肠粘膜修复的影响通过多因素法“五味偏食+游泳力竭+控制饮食”建立脾虚泄泻大鼠模型,造模完成后,随机分成补中益气汤组、补中益气汤倍“升麻-柴胡”组及补中益气汤去“升麻-柴胡”组,分别予以相对应的药物进行干预,通过光镜下观察小肠绒毛结构,并运用医学影像分析系统测量小肠绒毛高度及宽度,以及透射电镜观察小肠微绒毛结构。3.补中益气汤益气升阳配比组方对脾虚泄泻大鼠葡萄糖转运体GLUT2相关基因表达的影响通过多因素法“五味偏食+游泳力竭+控制饮食”建立脾虚泄泻大鼠模型,造模完成后,随机分成补中益气汤组、补中益气汤倍“升麻-柴胡”组及补中益气汤去“升麻-柴胡”组,分别予以相对应的药物进行干预后提取小肠粘膜总RNA,运用RT-PCR法检测葡萄糖转运吸收相关基因GLUT2、Na+-K+-ATPase、T1R2+T1R3、Cavl.3、PKC-β-ⅡI亚型基因的表达。成果：1.体重、宏观积分及胸腺、胰脏指数：模型组大鼠体重明显下降,宏观积分明显上升(P<0.05)。胸腺指数及脾脏指数明显下降(P<0.05)；补中益气汤组体重、胸腺指数、脾脏指数均明显上升,宏观积分下降(P<0.05)。而其他两组一些指标上改变不明显。(P>0.05)2.病理学检测：模型组大鼠小肠绒毛形态破坏,炎症细胞浸润,上皮细胞缺失；细胞器破坏,小肠绒毛的高度及宽度均明显降低(P<0.01)。经补中益气汤干预后补中益气汤组小肠粘膜修复明显,绒毛的高度及宽度均可见升高(P<0.01)。而倍“升麻-柴胡”组及去“升麻-柴胡”组病理学上改变不明显(P>0.05)。3.葡萄糖转运吸收相关基因：模型组肠道粘膜GLUT2、Na+-K+-ATP酶、PKC-β-Ⅱ亚型表达量明显降低(P<0.05)。TIR2、T1R3及Cavl.3表达量亦明显降低(P<0.05)。经补中益气汤不同配比组方干预后,各组脾虚泄泻大鼠模型基因表达均有所升高。其中,补中益气汤原方组,各基因的表达量均明显升高(P<0.01)。而倍“升麻-柴胡”组及去“升麻-柴胡”组升高不明显(P>0.05)。结论：脾虚泄泻大鼠一般状态变化、体重、胸腺指数、脾脏指数下降；小肠绒毛损伤；肠道粘膜葡萄糖转运吸收相关基因表达下降,从而证实了脾虚泄泻的发生与葡萄糖吸收障碍相关,且与肠道粘膜上PKC-β-Ⅱ-GLUT2-TIR2、T1R3/Cav1.3通道密切相关。而补中益气汤通过改善小肠粘膜,提升该通道基因表达,从而达到治疗脾虚泄泻；其中,尤以补中益气汤原方配伍为最佳,进一步证实了补中益气汤益气升阻的配伍应当为益气药与升阳药共用,并且大剂量的益气药与小剂量的升阳药的配伍更能体现其益气升阳功效。