中药有效成分靛玉红对肿瘤细胞抑制作用的研究

目的:中药抗肿瘤成份靛玉红可通过3种途径对肿瘤细胞的生长发挥抑制作用,分别为竞争性拮抗CDK激酶的ATP结合位点;抑制Src激酶、阻断Stat3信号通路;抑制核苷酸转运蛋白。同时靛玉红可与其配基AhR受体结合对其自身进行调控。因此推测靛玉红可抑制与CDK、Src激酶有关的人类肿瘤细胞的生长。本实验即通过多种肿瘤细胞的体外培养及MTT方法验证此推测。同时通过造血祖细胞体外培养,观察靛玉红对造血祖细胞的影响。 方法:用半固体细胞集落培养方法观察靛玉红对的人白血病细胞株K562、人胃癌细胞株、人淋巴瘤细胞株、人宫颈癌细胞株Hela、人早幼粒白血病细胞株HL-60、肝癌、肝门胆管癌细胞株的影响。靛玉红用二甲基亚砜溶解并稀释为1mg/ml,100μg/ml,10μg/ml不同剂量组,将药物与细胞株经37℃水浴作用30分钟后,离心20分钟,洗去药物,细胞重新制成单细胞悬液,计数后加入培养体系,放入37℃饱和湿度5%CO2培养箱中培养6天,观察集落数目。分别给实验动物(小鼠、大耳白兔)口服靛玉红,给小鼠分别口服靛玉红4mg/kg,8mg/kg,16mg/kg不同剂量,24小时后从小鼠眼眶取血并分离药物血清;给兔口服靛玉红药物胶囊(133mg/kg),分别于服药后2小时、4小时、6小时、8小时、24小时等不同时间取兔血浆,使用时直接将药物血清/浆加入培养体系培养6天观察宫颈癌、胃癌、K562、胆囊癌、肝门胆管癌集落数目。用MTT方法观测靛玉红对K562、胆囊癌、肝门胆管癌细胞株的影响。同时用半固体细胞集落培养方法,观察靛玉红及其药物血清/浆对粒系、红系、巨核系、混合系造血祖细胞的影响。 结果:靛玉红对这几种肿瘤存在广泛的抑制作用。1.靛玉红对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用结果:靛玉红浓度剂量在0.5—100μg/ml范围内体外对人宫颈癌、肝癌、淋巴瘤、肝门胆管癌、人红白血病K562细胞株及人早幼粒白血病HL60细胞株均具有显著的抑制作用,但对人胃癌细胞株的抑制作用不明显。 2.不同浓度的小鼠药物血清对肿瘤细胞生长的抑制作用结果:小鼠药物血清对宫颈癌、胃癌存在抑制作用。 3.服用相同剂量靛玉红的兔药物血浆对肿瘤细胞生长的抑制作用结果:靛玉红兔药物血浆对胃癌细胞株产生明显的抑制作用,且服药后2小时即出现显著抑制作用,其抑制作用维持至服药后96小时。对于K562、胆囊癌、肝门胆管癌细胞株,靛玉红兔药物血浆的抑制作用在服药后4-6小时出现,至服药后96小时作用已有所减弱。 4药后24小时不等量鼠药物血清对K562细胞的作用结果:服药后24小时小鼠药物血清,0.05ml至0.4ml各组均对K562细胞存在抑制作用,但0.05ml组对K562细胞抑制作用较其他剂量(0.1-0.4ml)弱。 5.用MTT方法结果:靛玉红兔血浆对K562、胆囊癌、肝门胆管癌细胞株均存在抑制作用,每种细胞株对靛玉红药物血浆敏感性不同,K562在药后2至24小时均被抑制,胆囊癌在药后8小时才出现抑制作用,24小时抑制作用最强,而肝门胆管癌在药后2小时出现抑制作用,随后抑制作用逐渐减退。 6.靛玉红对各系骨髓造血祖细胞的作用结果:不同剂量的靛玉红小鼠药物血清对各系造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg,CFU-Mix)均无抑制作用。对粒系及红系造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E,BFU-E)还存在轻度的刺激生长的作用,其作用与药物血浆的浓度无关。此外,不同时间的靛玉红兔药物血浆对粒系造血祖细胞也存在刺激作用,体外培养结果同样证实靛玉红对粒系造血祖细胞的刺激作用。