泰山白首乌是我国传统的名贵中药材和保健食品,它具有多方面的药
理作用和生物活性。本文系统的研究了泰山白首乌多糖(PRCB)的提取工
艺、分离纯化过程、并通过免疫研究探讨了白首乌多糖的活性功能。主要
研究结果如下:
1 白首乌多糖的提取工艺
影响多糖提取率的主要因素有温度、时间和料水比等。为确定白首乌
中可溶性多糖的提取工艺,本次实验料液比采用 1:15、1:20、1:25 三个水
平,浸提温度采用 80℃、90℃、100℃三个水平,浸提时间采用 1 h,2 h,
3 h 三个水平,浸提次数采用 1 次、2 次、3 次三个水平,分别进行单因素
试验。根据预实验结果,选料水比、浸提温度、浸提时间三项作为考察因
素,各取三个水平,进行 L9(33)正交实验设计。
新鲜的白首乌,植物粉碎机粉碎后用无水乙醇提取数次,残渣风干。
按一定料水比、水浴温度、浸提时间,在热水浴中回流浸提数小时,水浴
浸提后,上清液用酶法去除淀粉,用苯酚-硫酸法测吸光度,以标准曲线
和换算因子计算样品中多糖含量。
通过单因素试验和正交试验,确定白首乌多糖的最适提取条件为:
料水比为 1:20,浸提温度为 100℃,浸提时间为 2 h,提取次数 1 次。
2 白首乌多糖的分离、纯化及理化性质
白首乌多糖水提取液,经酶法去除淀粉,Sevag 法去蛋白质,95%乙
醇沉淀,80%乙醇洗涤后,真空干燥即得白首乌可溶性总多糖。用 DEAE-
纤维素柱层析,通过蒸馏水和 NaCl 溶液梯度洗脱,再通过透析、浓缩,
冷冻干燥得 3 个白首乌多糖组分 PRCB1、PRCB2、PRCB3,干品分别是
白色、黄色或棕色的絮状固体,得率分别是 32.2%、9.8%、13.9%。PRCB1
经过 Sephadex G-100 柱层析,用水洗脱,得一乳白色组分 PRCB1a,得率
为 28%。PRCB1a 经凝胶柱层析法、紫外光谱法鉴定纯度,表明为分子量
分布均一组分。红外光谱分析 PRCB1a 为吡喃糖,薄层层析表明 PRCB1a
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白首乌可溶性多糖的提取工艺、分离纯化及免疫功能研究
由葡萄糖组成。
3 白首乌多糖的免疫调节作用
主要研究了 PRCB 及 PRCB1a 的免疫调节作用,主要包括:对 T 淋
巴细胞的增殖作用;对免疫器官的调节作用;对腹腔巨噬细胞的吞噬能力
的影响;迟发型超敏反应;碳廓清试验的影响。
3.1 白首乌多糖体外对 T 淋巴细胞的增殖作用
白首乌总多糖各剂量组与对照组比较,T 淋巴细胞的转化率差异均有
极显著性(P<0.01),说明 PRCB 在体外能显著增强兔子 T 淋巴细胞的转
化作用,并呈剂量相关性,以 50 mg/(kg·d)剂量组的转化率最高。PRCB1a
各剂量组与对照组比较,差异均有极显著性(P<0.01),说明 PRCB1a 在
体外能显著增强兔子 T 淋巴细胞的转化作用,并呈剂量相关性,以 100 mg/
(kg·d)剂量组的转化率最高。
3.2 白首乌多糖对免疫器官的调节作用
PRCB 和 PRCB1a 各剂量组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。与对照
组胸腺指数比较,PRCB 在 150 mg/(kg·d);PRCB1a 在 50 mg/(kg·d)、
100 mg/(kg·d)剂量组,差异有极显著性(P<0.01)。与对照组脾脏指
数比较,PRCB 在 50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、150 mg/(kg·d)
剂量组;PRCB1a 在 100 mg/(kg·d)剂量组,差异有极显著性(P<0.01)。
表明白首乌多糖对小白鼠免疫器官有显著影响,并有剂量相关性。
3.3 白首乌多糖对腹腔巨噬细胞的吞噬能力的影响
PRCB 和 PRCB1a 各剂量组均可明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功
能,与对照组比较,吞噬率均达到极显著水平(P<0.01)。PRCB 和 PRCB1a
的 50 mg/(kg·d)和 100 mg/(kg·d)剂量组的吞噬指数也达到了极显
著水平(P<0.01)。PRCB 的 50 mg/(kg·d)剂量组和 PRCB1a 的 100mg/
(kg·d)剂量组的增强作用最突出。
3.4 白首乌多糖对小鼠迟发型超敏反应的作用
与对照组相比,PRCB 和 PRCB1a 分别在 50 mg/(kg·d),100 mg/(kg·d)
剂量组,对小鼠迟发型超敏反应有极显著的增强作用(P<0.01)。
3.5 白首乌多糖对碳廓清试验的影响
与对照组比较,PRCB1a 在 50 mg/(kg·d),100 mg/(kg·d)剂量组,
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山东农业大学硕士学位论文
能极显著加速碳粒的清除(P<0.01);PRCB 在 100 mg/(kg·d)剂量组能
显著加速碳粒的清除(P<0.05)。
本试验研究表明,PRCB 和 PRCB1a 各剂量组,均能极显著的(P<0.01)
促进 PHA 诱导的家兔 T 淋巴细胞在体外的增殖能力;在对小鼠的免疫试验
中,PRCB 和 PRCB1a 能增加小鼠胸腺和脾脏的重量,增强小鼠腹腔巨噬细胞
的吞噬功能,加速碳粒的清除,提高机体的非特异性免疫。白首乌总多糖
和其组分可显著增强 SRBC 诱导的小鼠迟发型超敏反应,表明白首乌多糖对
机体特异性细胞免疫功能也有显著增强作用。白首乌多糖可增强非特异性
和特异性细胞免疫功能,说明白首乌多糖在抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等
方面可能有重要作用和应用前景。
