加味升降散抑制人胰腺癌细胞PANC-1的生长增殖及其初步机理研究

目的:本课题以人胰腺癌细胞PANC-1作为研究对象,分别比较不同时间,不同浓度下加味升降散对PANC-1细胞生长增殖的抑制作用,对细胞凋亡的诱导作用,同时与其主要成份姜黄素的作用效应对比。初步探讨加味升降散作用胰腺癌细胞的信号通路,抗肿瘤的分子机制,为加味升降散应用于临床治疗胰腺癌提供相应理论和实验依据。方法:1.采用MTT法分别检测不同浓度加味升降散(10、20、30、40、50mg/ml)和其主要效应成分姜黄素经过24h、48h、72h作用对人胰腺癌细胞PANC-1生长增殖的影响,同时将两者的抑制率进行对比。2.采用Annexin V-FITC与碘化丙啶(promideiodine,PI)双染色法,通过流式细胞仪分别检测不同浓度加味升降散和其主要效应成分姜黄素作用人胰腺癌PANC-1细胞48小时后对细胞凋亡的影响。3.采用Western Blot法研究不同浓度加味升降散作用人胰腺癌细胞PANC-1后,对PI3/AKT信号通路中P85、P110、AKT、P-AKT蛋白表达的影响,从而初步探讨加味升降散作用人胰腺癌PANC-1细胞的分子机制。结果:1.加味升降散对人胰腺癌PANC-1细胞生长增殖的抑制作用在一定程度上呈时间和剂量依赖性,低浓度组(10mg/ml)作用不明显,高浓度组具有明显的抑制肿瘤细胞生长增殖的作用,其效果优于阳性药组及其主要效应成分姜黄素组,结果具有统计学差异(P<0.05)。2.经不同浓度的加味升降散和姜黄素作用于人胰腺癌细胞48h后,PANC-1细胞的总凋亡率随着浓度升高而逐渐增加。低浓度组别细胞凋亡情况不明显,但在高浓度药物组别作用下,部分细胞形态发生改变,凋亡率呈剂量依赖性。加味升降散作用人胰腺癌细胞PANC-1的凋亡率高于同组别姜黄素。3.经不同浓度的加味升降散处理人胰腺癌细胞PANC-1后,PI3K的两个亚基蛋白P85、P110的表达水平随浓度增高而有所下降,总AKT表达水平变化趋势不明显,而磷酸化AKT尤其在高浓度组别作用下(40mg/ml)表达水平明显降低。结论:加味升降散具有一定抑制人胰腺癌细胞PANC-1生长增殖的作用,并诱导人胰腺癌细胞PANC-1凋亡,其复方作用效应优于单药成分姜黄素。其作用机理可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路活性来实现,这也可能是其抗肿瘤的作用机制之一。