醋柴胡对大鼠肝细胞影响的试验研究

目的 通过引经药醋柴胡水提液对大鼠肝膜通透性、细胞内pH值、膜成分、膜形态、p-糖蛋白的表达等变化的研究,从药物作用的不同环节探讨醋柴胡引经的作用的可能机理。 方法 以MTT法检测确定醋柴胡水提液对大鼠肝细胞试验的最佳剂量;应用流式细胞仪测定细胞内荧光强度,以确定醋柴胡对大鼠肝细胞膜通透性影响;通过荧光探针法研究醋柴胡水提液对火鼠肝细胞内pH值的变化,运用荧光分光光度计测定大鼠肝细胞内的荧光强度比以计算细胞内pH值;测定细胞膜蛋白和胆固醇含量运用自动生化分析仪,测定细胞膜磷脂含量应用薄层扫描法;观察醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜的形态的影响应用电子镜显微镜;醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜上p-糖蛋白的表达,应用流式细胞仪法。 结果 醋柴胡水提液对大鼠肝细胞有增殖作用,且在0.16mg/ml-4mg/ml这个浓度范围内对大鼠肝细胞的增殖作用最强,本实验选用10 mg/mL,2 mg/mL,O.4 mg/mL三个浓度组;醋柴胡对细胞膜通透性的影响表明,醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜通透性影响随着药物作用时间的延长,其膜的通透性逐渐增加,且药物组与空白组比较有显著差异,其p<O.01;醋柴胡水提液对细胞质内pH值影响随时间、浓度不同而不同,24h各药物剂量组细胞质中pH与空白组细胞相比有统计意义,其p<O.01;加药组囊泡膜内pH值呈现下降的趋势,药物作用18h的组囊泡膜内pH值与空白相比有统计意义,其p<O.05,但不同浓度组间无统计意义,其他各组细胞内及囊泡膜内pH值均与对照组没有显著差异;醋柴胡水提液对大鼠肝细胞组分的结果表明,药物对细胞膜组分的影响随时间、浓度不同而不同。12h各药物浓度组与24h高浓度组使膜蛋白总含量均降低,与空白组相比有统计意义,其p(O.01。24h低浓度组与48h低中浓度组使细胞膜蛋白总量增加,与空白组相比有统计意义,其p<O.01。药物作用3小时,除磷脂酰丝氨酸以外,低浓度醋柴胡使细胞膜内的鞘磷脂、磷脂酰胆碱与磷脂酰乙醇胺含量均增加,与空白组相比有统计学意义,其p<O.05;而中高浓度组使细胞膜内的鞘磷脂、磷脂酰胆碱与磷脂酰乙醇胺含量都有所下降,具有统计学上的显著差异,其p<O.05。而其它时间点药物组与空白组相比没有显著差异;醋柴胡对大鼠肝细胞膜表面形态影响不大,其中高浓度组的细胞膜表面特化部分如桥粒、微绒毛遭到轻微的破化,细胞膜表面变得比较光滑;醋柴胡对p-糖蛋白的结果表明,醋柴胡可降低p-糖蛋白在大鼠肝细胞膜上的表达,特别是中低浓度组对p-糖蛋白影响较大。 结论 醋柴胡水提液在O.16mg/m1-4mg/ml范围内对大鼠肝细胞有增殖作用,能增加大鼠肝细胞膜的通透性和降低大鼠肝细胞膜p-糖蛋白的表达,醋柴胡对大鼠肝细胞内pH值影响和膜形念影响不显著,醋柴胡不同浓度在不同时间点对大鼠肝细胞膜组分有着不同的影响,在药物作用早期对细胞膜脂有影响,随着药物作用时间的延长,药物对细胞膜总蛋白又有影响,其具体的影响规律及机理还有待进一步研究和探讨。以上结果提示,醋柴胡有可能通过影响细胞膜组成及表面P糖蛋白等因素影响细胞膜的通透性,进而影响药物的肝摄取。