温肾健脾法对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织TLR/IL-1信号通路调控因子基因表达影响的研究

目的采用“病-证”结合的方法制作脾肾阳虚型溃疡性结肠炎动物模型,从分子和激素水平探讨中医“脾肾阳虚”证的现代科学物质基础。采用温肾健脾法代表方剂四神丸对大鼠进行干预,通过观察大鼠症状、结肠粘膜并检测相关指标,明确温肾健脾法对UC的治疗作用。观察大鼠结肠组织中Toll样受体/白细胞介素-1(TLR/IL-1)信号通路正、负性调控因子基因表达在给药前后的变化,从而揭示温肾健脾法防治溃疡性结肠炎的部分作用机理。方法采用三硝基苯磺酸灌肠,叠加番泻叶灌胃、氢化可的松腹腔注射的方法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型,给予四神丸进行干预治疗,用西药柳氮磺胺嘧啶进行对照。观察大鼠的一般状态和症状,结肠粘膜肉眼及光镜观察,并采用放射免疫(RIA)法检测血清相关生化指标如T、FT3、FT4、IgE、IL-2,对“病-证”结合动物模型进行评判。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠结肠组织TLR/IL-1信号通路正、负性调控因子TLR4、IRAK-M、Tollip mRNA的相对表达量。结果①动物模型评判指标的结果:模型组大鼠症状积分显著高于空白组(p<0.01),结肠组织肉眼评分明显高于空白组(p<0.01);光镜下显示结肠粘膜有炎性细胞浸润。模型组血清T、FT3、FT4、IL-2的表达均低于空白组,而IgE含量提高(p<0.01);SOD含量低而MDA含量高(p<0.01)。②温肾健脾法四神丸的治疗作用:四神丸可有效改善UC症状和体征,症状积分较模型组降低(p<0.01),结肠组织肉眼评分明显低于模型组(p<0.01);光镜下显示结肠粘膜炎性细胞明显减少。与模型组比较,四神丸组T、FT3、FT4、IL-2的表达均升高,而IgE含量下降(p<0.01),SOD升高明显(p<0.05)而MDA含量降低(p<0.05)。③TLR4、IRAK-M、Tollip mRNA:模型组大鼠结肠组织TLR4、Tollip mRNA阳性表达量较空白组处于较高水平(p<0.01);经药物治疗后,四神丸组与模型组相比TLR4、Tollip mRNA表达水平下降(p<0.01)。而空白组大鼠结肠组织IRAK-M mRNA表达较模型组处于较高水平(p<0.01);经药物治疗后,四神丸组与模型组相比,IRAK-M mRNA表达水平上升(p<0.01)。结论采用TNBS/乙醇溶液灌肠及番泻叶灌胃、氢化可的松腹腔注射的方法可成功制作脾肾阳虚型UC大鼠模型,脾肾阳虚证的现代科学物质基础与机体免疫失衡、激素环境紊乱、下丘脑-垂体-肾上腺功能减退等有关。温肾健脾法四神丸对溃疡性结肠炎,尤其对慢性期、缓解期的疗效良好,下调TLR4、IRAK-M,上调Tollip基因水平是其防治UC的作用机理之一。观察温肾健脾法对TLR/IL-1信号通路的正、负性调控相关因子基因相对表达量的影响,探讨温肾健脾法可通过整体调节机体“阴阳平衡”而恢复“肠粘膜免疫稳态”,达到防治UC的目的。