半枝莲多糖的提取分离纯化、表征鉴定及抗氧化活性研究

半枝莲是唇形科黄芩属多年生草本植物，在我国具有悠久的药用历史。为了加强对半枝莲的综合利用，本研究以中草药半枝莲（半枝莲地上部分）为研究对象，对半枝莲多糖的提取、纯化、检测及抗氧化活性进行研究。通过单因素实验和正交试验考察了温度、时间、料液比等因素对多糖提取率的影响。利用葡聚糖凝胶和离子交换层析分离技术对多糖进行纯化，经快速层析纯化系统（FPLC）和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯度，运用质谱考察了其单糖组成，采用体外化学模拟和体内实验对多糖的抗氧化活性进行了探讨，试验结果如下： 1优化了半枝莲粗多糖提取工艺参数，得到水提最佳浸提参数为：温度70℃，时间6h，料液比1∶30，浸提1次，多糖得率为2.703％。 2半枝莲粗多糖经DEAE-Cellulose-52和Sepharose 4B纯化，获得了两个组分SBPW和SBPS，其红外光谱均在3420（O-H）、2940（C-H）、1665（C=O）、1445（C-O）、1120（C-O）cm-1等处有多糖的特征吸收峰，并且二者在877cm-1处均有吸收峰，表明存在吡喃糖苷键。 3苯酚-硫酸法测定了SBPW和SBPS的多糖含量分别为89.60％和92.57％；间羟联苯法测定糖醛酸含量分别为4.9％和19.6％。采用快速层析纯化系统（FPLC）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）鉴定SBPS为均一组分，并测定其相对分子质量为1.1×10～4Da；利用GC-MS分析其单糖组成为：鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比依次为1.00∶0.13∶0.80∶0.10∶0.34∶0.56∶3.04。 4通过化学模拟和对小鼠组织和体液的体外实验，研究了SBPW和SBPS的体外抗氧化活性。采用邻苯三酚法及Fenton体系测定SBPW和SBPS对O2-·和·OH的清除作用，SBPW的半数清除浓度IC50-SBPw分别为921.73μg／mL和89.26μg／mL；SBPs的半数清除浓度IC50-SBPs分别为800.00μg／mL和90.42μg／mL。实验结果表明，SBPW和SBPS具有很强的清除O2-·和·OH生成的活性，对各种活性氧均具有抗氧化作用，具有直接清除自由基和脂质过氧化的活性，可抑制小鼠肝组织的脂质过氧化，对Fe2+和H2O2诱导的肝组织过氧化物损伤具有保护作用，能减少红细胞溶血的发生。 5半枝莲多糖SBPW和SBPS按剂量小鼠腹腔注射，qd，连续35d，以分光光度法测定小鼠血清、肝组织中的超氧化物岐化酶（SOD）活力以及过氧化产物丙二醛（MDA）的含量。结果显示SBPW和SBPS能剂量依赖性提高小鼠血清、肝组织中的SOD活力，并可剂量依赖性降低小鼠血清、肝组织中MDA的水平。SBPW和SBPS表现出较好的抗氧化作用，提示其在维系体内自由基代谢平衡、延缓衰老方面具有一定的作用。