半枝莲多糖的提取分离纯化、表征鉴定及抗氧化活性研究

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作者
王志远
机构
[1] 安徽大学
关键词
半枝莲; 多糖; 提取; 纯化; 表征; 抗氧化;
D O I
暂无
年度学位
2007
学位类型
硕士
导师
摘要
半枝莲是唇形科黄芩属多年生草本植物,在我国具有悠久的药用历史。为了加强对半枝莲的综合利用,本研究以中草药半枝莲(半枝莲地上部分)为研究对象,对半枝莲多糖的提取、纯化、检测及抗氧化活性进行研究。通过单因素实验和正交试验考察了温度、时间、料液比等因素对多糖提取率的影响。利用葡聚糖凝胶和离子交换层析分离技术对多糖进行纯化,经快速层析纯化系统(FPLC)和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯度,运用质谱考察了其单糖组成,采用体外化学模拟和体内实验对多糖的抗氧化活性进行了探讨,试验结果如下: 1优化了半枝莲粗多糖提取工艺参数,得到水提最佳浸提参数为:温度70℃,时间6h,料液比1∶30,浸提1次,多糖得率为2.703%。 2半枝莲粗多糖经DEAE-Cellulose-52和Sepharose 4B纯化,获得了两个组分SBPW和SBPS,其红外光谱均在3420(O-H)、2940(C-H)、1665(C=O)、1445(C-O)、1120(C-O)cm-1等处有多糖的特征吸收峰,并且二者在877cm-1处均有吸收峰,表明存在吡喃糖苷键。 3苯酚-硫酸法测定了SBPW和SBPS的多糖含量分别为89.60%和92.57%;间羟联苯法测定糖醛酸含量分别为4.9%和19.6%。采用快速层析纯化系统(FPLC)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定SBPS为均一组分,并测定其相对分子质量为1.1×10~4Da;利用GC-MS分析其单糖组成为:鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比依次为1.00∶0.13∶0.80∶0.10∶0.34∶0.56∶3.04。 4通过化学模拟和对小鼠组织和体液的体外实验,研究了SBPW和SBPS的体外抗氧化活性。采用邻苯三酚法及Fenton体系测定SBPW和SBPS对O2-·和·OH的清除作用,SBPW的半数清除浓度IC50-SBPw分别为921.73μg/mL和89.26μg/mL;SBPs的半数清除浓度IC50-SBPs分别为800.00μg/mL和90.42μg/mL。实验结果表明,SBPW和SBPS具有很强的清除O2-·和·OH生成的活性,对各种活性氧均具有抗氧化作用,具有直接清除自由基和脂质过氧化的活性,可抑制小鼠肝组织的脂质过氧化,对Fe2+和H2O2诱导的肝组织过氧化物损伤具有保护作用,能减少红细胞溶血的发生。 5半枝莲多糖SBPW和SBPS按剂量小鼠腹腔注射,qd,连续35d,以分光光度法测定小鼠血清、肝组织中的超氧化物岐化酶(SOD)活力以及过氧化产物丙二醛(MDA)的含量。结果显示SBPW和SBPS能剂量依赖性提高小鼠血清、肝组织中的SOD活力,并可剂量依赖性降低小鼠血清、肝组织中MDA的水平。SBPW和SBPS表现出较好的抗氧化作用,提示其在维系体内自由基代谢平衡、延缓衰老方面具有一定的作用。
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页数:66
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