青藤碱对类风湿关节炎模型小鼠BMDC表面模式识别受体TLR2/TLR4的免疫调节机制研究

目的：既往研究发现青藤碱能影响模式识别受体下游的分子信号转导及表达,但其机理有待深入研究。本课题提出青藤碱可能通过影响模式识别受体进而治疗类风湿关节炎的假说。通过离体培养RA动物骨髓来源的DC,探索青藤碱对RA小鼠模式识别受体的影响,评价其在RA发病机制及病情进展中的作用,为青藤碱临床应用及上市后的评价提供实验室依据。方法：SPF级balb/c小鼠,依据文献进行改良后建立胶原诱导型类风湿关节炎模型(CIA),造模成功后脱颈处死小鼠,按照文献改良后进行骨髓来源的DC培养,第5天时加入LPS刺激DC成熟,在第6天时采用流式细胞直接免疫荧光标记法对所得的细胞检测CD11c, CD86的表达情况以鉴定DC细胞。把培养成熟的DC分为青藤碱高剂量组、青藤碱中剂量组、青藤碱低剂量组、模型组、空白组、甲氨蝶呤组,各组予以不同浓度青藤碱干预24小时后运用流式细胞技术检测TLR2、TLR4的表达情况,并将细胞培养上清液采用elisa法检测其IL-1、IL-10、TNF-a的水平。所有实验数据采用SPSS19.0软件进行统计分析。结果：1、牛Ⅱ型胶原联合完全弗氏佐剂对小鼠进行尾根部、腹部、足垫注射后在35天左右诱导出RA模型；2、IL-4及GM-CSF在第5天左右能够诱导骨髓源细胞转化为DC且DC在培养过程中常常处于集落状态；3、模型组小鼠TLR2、TLR4的表达明显高于空白组小鼠,提示类风湿关节炎造模过程可能影响小鼠BMDC表面TLR的表达；4、青藤碱干预后能够降低小鼠BMDC表面TLR2、TLR4的表达；5、青藤碱能到降低IL-1/TNF-α的分泌；6、青藤碱可能抑制DC的成熟。结论：青藤碱通过降低DC表面TLR2、TLR4的表达,影响下游相关信号转导通路,使相关炎症细胞因子的分泌减少,同时可能抑制DC的成熟,从而间接地抑制抗原递呈过程,影响T淋巴细胞的活化,抑制相关的免疫反应,从而阻止类风湿关节炎过程中慢性炎症的发生,使骨组织的破坏得到抑制,以达到治疗类风湿关节炎的作用。