麦粒灸对实验性RA大鼠IL-17-NF-KB通路的影响及抗炎效应机制研究

目的：在观察麦粒灸“肾俞”,“足三里”对SD大鼠RA模型抗炎治疗效应基础上,以慢病毒介导的IL-17A基因过表达为干预研究手段,探究麦粒灸治疗RA的抗炎效应机制,为麦粒灸治疗RA的I临床应用提供更丰富的实验依据。方法：以弗氏完全佐剂性关节炎作为类风湿关节炎大鼠模型,适应性驯养3周后,用SPSS统计软件将54只大鼠随机分为空白组、空白艾灸组、RA组、RA艾灸组、IL-17 ↑组,IL-17 ↑艾灸组,除空白组及空白艾灸组外,均用弗氏完全佐剂造模,IL-17 ↑组、IL-17↑艾灸组在RA造模后第1天注射IL-17A基因过表达慢病毒试剂,麦粒灸实验性RA大鼠的“肾俞”、“足三里”穴,记录屈伸关节疼痛试验评分(缩腿嘶鸣评分),测量大鼠右后足肿胀程度；并在疗程结束后用10%水合氯醛0.35m1/100g进行腹腔麻醉,将大鼠活体取材：大鼠股动脉取血,运用ELASA(酶联免疫吸附实验)方法测量各组大鼠血清中细胞因子IL-1b、TNF-a、IL-17A含量；取患侧踝关节组织,运用PCR(聚合酶链式反应)方法测量大鼠致炎侧踝关节IL-17-mRNA表达量,运用WB(免疫印记法)测量IKβ-zeta蛋白活性,整个实验均按照实验伦理学规定进行。结果：1.造模后RA组大鼠屈关节疼痛实验评分及足趾肿胀度明显上升,麦粒灸治疗后屈关节疼痛实验评分及足趾肿胀度降低。2.①类风湿关节炎大鼠血清中IL-1b、TNF-a、IL-17含量及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量较空白组明显增加(P<0.01)；经过21天治疗后,空白艾灸组与空白组血清中IL-lb、 TNF-a、IL-17含量及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量比较两组之间无显著性差异(P>0.05)；RA艾灸组与RA组比较,RA艾灸组IL-lb、TNF-a、IL-17含量及忠侧踝关节IL-17-mRNA表达量显著降低(P<0.01)；②类风湿关节炎大鼠血清中IKβ-zeta蛋白活性较空白组明显降低(P<0.01)；经过21天治疗后,空白艾灸组与空白组IKβ-zeta蛋白活性比较,两组之间无明显差异；RA艾灸组与RA组比较,RA艾灸组IKβ-zeta蛋白活性显著升高。3.①IL-17 ↑组与模型组比较,IL-17 ↑组IL-lb、TNF-a、IL-17含量及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量显著升高(P<0.01),IL-17 ↑艾灸组与IL-17 ↑组比较,IL-17 ↑艾灸组IL-lb、TNF-a、IL-17含量及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量显著降低(P<0.01)。②IL-17↑组与模型组比较,IL-17↑组IKβ-zeta蛋白活性显著降低,IL-17 ↑艾灸组与IL-17 ↑组比较,IL-17 ↑艾灸组IKβ-zeta蛋白活性明显升高。结论：1.麦粒灸可以降低屈关节疼痛实验评分及减轻佐剂关节炎大鼠的足趾肿胀度,提示麦粒灸对实验性RA大鼠有抗炎镇痛消肿的治疗作用。2.①麦粒灸可以降低RA大鼠血清中IL-lb、TNF-a、IL-17水平及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量,减少早期多种炎性因子的释放从而减轻滑膜炎症,改善局部症状。②麦粒灸可以增强RA大鼠患侧踝关节IKβ-zeta蛋白活性,提示艾灸可以增强IKβ-zeta的抗炎效应。3.①麦粒灸可以降低IL-17A过表达RA大鼠血清中IL-lb、TNF-a、IL-17含量及患侧踝关节IL-17-mRNA表达量,提示麦粒灸可以通过抑制IL-17释放,进而降低血清中IL-1b、TNF-a致炎细胞因子水平,进而达到抗炎效应。②麦粒灸可以增强IL-17过表达RA大鼠患侧踝关节IKβ-zeta蛋白活性,提示艾灸可以通过抑制IL-17释放增强IKβ-zeta的表达。