目的:本试验采用传统中药蒲公英的主要成分蒲公英甾醇为研究对象,探讨蒲公英甾醇的体外抗炎作用及其相关作用机制。
方法:本试验分为空白组、模型组、蒲公英甾醇(低、中、高剂量)组。通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞建立体外炎症体系,采用MTT法进行细胞毒性测定,确定蒲公英甾醇安全使用剂量;通过Griess法测得炎症介质NO的含量,通过ELISA法测得炎症介质PGE2的含量;通过RT-PCR检测RAW264.7细胞中COX-2和iNOS mRNA的表达;通过Western blot法检测iNOS和COX-2蛋白的表达,并检测ERK1/2、JNK和p38MAPK及其磷酸化水平的表达。
结果:
1.蒲公英甾醇抗炎作用检测结果显示:与模型组相比较,蒲公英甾醇剂量组炎症反应明显减弱,显著抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞NO和PGE2的生成;蒲公英甾醇分别不同程度的抑制了iNOS和COX-2mRNA和蛋白的表达,且呈一定的剂量依赖关系。
2.蒲公英甾醇抗炎机制检测结果显示:蒲公英甾醇显著的抑制了LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞p38和ERK1/2激酶的磷酸化,并呈剂量依赖关系,但对JNK激酶磷酸化的抑制作用不显著。
结论:蒲公英甾醇通过抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞ERK1/2和p38MAPK信号传导通路抑制iNOS和COX-2mRNA和蛋白表达,从而降低细胞炎症介质NO和PGE2的释放,发挥其体外抗炎作用。