乌骨鸡（Gallus gallus domesticus brisson）属于鸟纲、鸡形目、雉科、鸡属,是我国特有的药用保健鸡种,主要产于江西省泰和县武山。作为传统中药,既可单独食用又可配药入复方,具有补肝肾、益气血、退虚热、治心腹痛等功效。乌骨鸡最显著的特征是它体内含有大量黑色素。现代药理研究表明乌骨鸡黑色素具有抗诱变、提高机体免疫力、延缓衰老、抑制病毒、消除自由基、抗氧化等功能。由此可见乌骨鸡的药理作用与其体内的黑色素密切相关。目前对乌骨鸡的研究虽已取得了一定的成果,但对于乌骨鸡黑色素还缺乏系统深入的研究,对其作用机理也不太明了,因此对黑色素的深入研究对于其作用机理及产品开发具有相当大的现实意义。本文通过对乌骨鸡黑色素的测定方法、溶解特性、光谱学特征、氨基酸残留的研究,进一步阐明乌骨鸡黑色素的性质、结构特征以及沉积分布规律,以期为黑色素的有效提取利用和产品开发研究提供可靠的基础数据,从而对大幅增加乌骨鸡这一闻名全球的药用资源的附加值,发掘我国的优秀物种资源,具有较高的经济价值和现实意义。现将主要研究概括如下:
1、建立了乌骨鸡黑色素含量的分光光度法定量测定方法。通过考察乌骨鸡黑色素在不同溶剂中的溶解性,确定了其在0.1 mol/LNaOH溶液中溶解性较好,在此基础上建立了乌骨鸡黑色素含量的分光光度法测定方法。方法学考察表明该法精密度、稳定性好,加标回收率高。采用此方法对不同部位黑色素测定结果表明:乌骨鸡不同部位黑色素含量差异较大,以骨膜中最高,达到3.749 mg/g,心脏中含量最低,仅有0.138 mg/g。
2、建立了乌骨鸡黑色素含量的高效液相定量测定方法。通过测定乌骨鸡黑色素的氧化特征产物2,3-二羧酸吡咯（PDCA）和2,3,5-三羧酸吡咯（PTCA）,建立了高效液相法测定乌骨鸡黑色素含量的方法。其色谱条件为:色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;二极管阵列检测器;检测波长分别为282.8 nm（PDCA）和269.8 nm（PTCA）;流动相为0.1%甲酸/甲醇梯度洗脱;流速为0.6 mL/min。方法学考察表明该法精密度、稳定性好,加标回收率高。采用此方法对不同部位黑色素含量测定结果表明:骨膜＞气管＞鸡冠＞鸡爪＞鸡肠＞腿肌＞鸡皮＞鸡肫＞胸肌＞鸡心。用HPLC方法测得的结果与分光光度法的测定结果相关性良好,相关系数达0.978。
3、考察了乌骨鸡不同部位黑色素的紫外.可见光谱和红外光谱性质,并对其进行光谱学性质差异研究。研究表明乌骨鸡不同部位黑色素在紫外-可见光区都无明显特征吸收峰,在200～400nm呈现吸光值迅速增加的特征,与合成黑色素相比,在290～300 nm的吸收峰表明乌骨鸡黑色素与蛋白质紧密结合。傅立叶红外光谱分析显示乌骨鸡各部位黑色素的红外光谱差异不大,其特征吸收峰主要集中在3600～3000 cm-1,2850～2950 cm-1,1610～1690 cm-1,1520～1540cm-1,1380～1360 cm-1,1240～1200 cm-1六组峰上,其中以主要象征吲哚环的吸收峰最强,故初步推测乌骨鸡黑色素为一种具有真黑素特征的吲哚类物质,同时红外光谱显示乌骨鸡黑色素含有一定量的蛋白质或氨基酸。
4、建立了2,4-二硝基氟苯柱前衍生测定乌骨鸡黑色素中的氨基酸含量的方法。通过考察柱温、衍生试剂用量、流动相体系、流动相pH值等因素对分离效果的影响,确定了氨基酸的最佳分离条件。其色谱分析条件为:Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;二极管阵列检测器:检测波长:360 nm;流动相为乙酸钠缓冲盐（pH=6.8）/乙腈水梯度洗脱;柱温27℃。采用此方法对黑色素的氨基酸分析表明乌骨鸡不同部位黑色素中的氨基酸含量差异较大,其中气管、鸡冠、鸡肠黑色素中氨基酸含量较低,鸡冠中仅有13.70μg/100μg,鸡肫氨基酸含量最高,达到35.54μg/100μg。
