苦参生物碱的吸脱附研究及氧化苦参碱的分离

本文主要对苦参生物碱在大孔树脂上的吸脱附行为进行研究,包括吸附等温曲线、吸附动力学行为及动态吸脱附过程等；并以溶剂萃取的苦参总碱为原料,采用大孔树脂柱层析法分离其中的氧化苦参碱,重点考察了各工艺条件对分离效果的影响。 首先,考察了苦参生物碱的分析检测方法。鉴于检测方法应符合快速、灵敏、准确的原则,考虑到实验室已有苦参碱标样和氧化苦参碱标样,我们提出了采用酸碱滴定法、TLC、HPLC和GC-MS四种方法对苦参生物碱进行定性、定量分析的方案。首先采用酸碱滴定法对溶剂提取的苦参总碱进行含量测定,并对总碱进行HPLC分析,其次在苦参生物碱的吸脱附研究中,采用TLC对分离样品进行定性和半定量分析。在氧化苦参碱的分离中,采用HPLC跟踪检测洗脱样品,并采用GC-MS对样品中的氧化苦参碱进行准确定量。 其次,采用溶剂萃取法从苦参中得到苦参总碱,通过酸碱滴定,确定了苦参总碱的收率为0.803%,HPLC分析发现,总碱中成分复杂,苦参碱的保留时间为10.099min,含量仅为5.06%,氧化苦参碱的保留时间为14.953min,含量为21.08%。另外,保留时间在12.6min附近具有较强吸收峰的物质,经查阅文献确定为氧化槐果碱,含量为5.56%。 再次,对苦参生物碱在大孔树脂上的吸脱附进行研究。首先,从九种大孔树脂中筛选出适合吸附苦参生物碱的H103树脂,其吸附率为85.86%,通过研究苦参生物碱在H103大孔树脂上的吸附等温曲线和吸附动力学行为,发现其符合Freundlich方程,所选出的H103大孔树脂具有很大的饱和吸附量,吸附能力较强。吸附过程符合二级动力学方程,吸附平衡在100mmin内就可达到,吸附速度较快,进一步确定了所筛选出的H103大孔树脂适合后续的动态吸脱附实验。动态吸脱附研究发现,采用梯度洗脱,以30%乙醇-25%氨水(115：1,v/v)、80%乙醇为洗脱剂,苦参碱和氧化苦参碱可以很好的分离。经计算苦参碱的收率为90.1%,氧化苦参碱的收率为85.3%。 最后,筛选出对苦参总碱吸附性能较好的H103树脂,利用大孔树脂柱层析法从苦参总碱中分离氧化苦参碱。确定了分离氧化苦参碱的洗脱剂为30%乙醇-25%氨水(115：1,v/v)。对不同工艺条件下所得的样品进行HPLC分析,最终得出最优的柱层析工艺条件：H103树脂采用乙醇湿法装柱,树脂柱的高径比选为33：1,30%乙醇-25%氨水(115：1,v/v)为洗脱剂以2.0mL/min的流速洗脱。为了进一步确定样品中氧化苦参碱的准确纯度,又对样品作了GC-MS分析,GC-MS结果表明,氧化苦参碱的峰面积百分数高达91.53%,经计算富集率为78.19%。可见,采用H103大孔树脂柱层析法可以实现氧化苦参碱的较好分离。