丙泊酚通过调节TLR4/ROS/NF-κB信号通路抑制肥大细胞依赖型哮喘小鼠气道炎症的研究

研究目的哮喘是一种呼吸道慢性炎症疾病,其主要病理特点是气道高反应性伴可逆性气流阻塞,气道粘液分泌增加以及嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞等炎性细胞参与的气道慢性炎症反应。麻醉过程中严重的哮喘发作会引起支气管痉挛,导致通气困难甚至低氧血症,严重威胁到患者的生命安全。丙泊酚是一种广泛应用于临床的静脉麻醉药物其抗炎作用受到广泛关注。在感染或缺血再灌注引起器官炎症损伤的研究中发现丙泊酚的抗炎作用与调节Toll样受体4（toll-likereceptor4,TLR4）和核转录因子（nuclearfactor-kappaB,NF-κB）相关信号通路,减少细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）减轻氧化应激有关。而丙泊酚对肥大细胞依赖型哮喘有何影响目前尚不清楚。研究表明激活肥大细胞表面的TLR4及其适配子髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）后能引起胞内 ROS 增加,激活 NF-κB,最终促进肥大细胞分泌Th2型细胞因子,加重过敏性哮喘。综上所述,本研究拟通过建立肥大细胞依赖型哮喘模型并在哮喘激发阶段使用丙泊酚干预,观察丙泊酚对肥大细胞依赖型哮喘气道炎症的影响;并对TLR4/MyD88/ROS/NF-κB信号通路中相关分子进行检测,进一步探讨丙泊酚减轻肥大细胞依赖型哮喘炎症的机制。研究方法雌性BALB/c小鼠,6～8周龄,体重20～25 g采用随机数字表法随机分为①正常对照组（PBS）:致敏及激发均使用磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）;②哮喘组（OVA）:小鼠致敏及激发均使用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）;③丙泊酚处理组（OVA+PPF）:小鼠在OVA激发前30 min腹腔注射丙泊酚（propofol,PPF）100 mg/kg;④脂肪乳处理组（OVA+LIP）:小鼠在OVA激发前30 min腹腔注射脂肪乳（intralipid,LIP）100 mg/kg。分别于第1、3、5、7天给予小鼠腹腔注射50 ug OVA致敏,并于第22、25、28天进行OVA滴鼻激发哮喘反应。于第29天处死小鼠取肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）用于细胞分类计数及细胞因子检测。取右肺组织用于蛋白质检测,左肺用于组织病理染色。实验结果与正常对照组相比,哮喘组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞都显著增多,细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α分泌水平显著升高,支气管周围、血管周围间隙炎症细胞浸润显著增加,炎症评分显著增高,支气管内杯状细胞增生、PAS评分显著增高。丙泊酚处理组与哮喘组相比,BALF中炎症细胞数量、细胞因子水平明显降低,气道炎症评分及PAS评分也明显下降。与正常对照组相比,哮喘组小鼠肺组织中TILR4和MyD88表达显著增加,H2O2和MDA显著增高,SOD水平明显降低;I-κBα表达明显减少,p-I-κBα及p-NF-κBp65表达明显增多。丙泊酚处理组与哮喘组相比,TLR4和MyD88表达明显下降H2O2和MDA明显减少,SOD水平升高;I-κBα表达明显增多,p-I-κBα及p-NF-κBp65表达明显减少。结论1.丙泊酚可以减轻肥大细胞依赖型哮喘小鼠的气道炎症反应。2.TLR4/MyD88/ROS/NF-κB信号通路参与肥大细胞依赖型哮喘小鼠的气道炎症反应。3.丙泊酚抑制TLR4/MyD88/ROS/NF-κB信号通路可能是其减轻肥大细胞依赖型哮喘小鼠气道炎症的机制。研究目的尽管呼气末二氧化碳监测能实时反映患者通气状态,及时发现呼吸暂停、呼吸抑制等异常。但对于将呼末二氧化碳监测普遍应用于胃肠镜检查的镇静中仍存在较大争议。本研究拟通过meta分析的方法,评价呼末二氧化碳监测对减少胃肠镜检查的镇静中低氧血症、严重低氧血症及其它麻醉相关不良事件的有效性,来探讨胃肠镜检查的镇静中加用呼气末二氧化碳检测是否对患者预后有益。研究方法检索Ovid Medline、EMBASE、Cochrane Library数据库。纳入比较胃肠镜检查的镇静中标准监测与加用呼末二氧化碳监测对麻醉相关并发症影响的随机对照试验。依据Cochrane系统评价标准对纳入文章进行偏倚评价。以低氧血症和严重低氧血症为主要结局指标。根据异质性大小使用固定效应模型或随机效应模型,以相对危险度（relativerisks,RR）±95%CI报告结果。研究结果一共纳入五篇文献共计2227名患者。结果发现与标准监测相比,加用呼末二氧化碳监测可以显著降低低氧血症发生率（RR 0.76;95%CI 0.63-0.91;P=0.003,户=64%）和严重低氧血症发生率（RR0.63;95%CI0.44^0.90;P=0.01,J2=55%）。在亚组分析中发现,在胃肠镜操作时间≥30min的研究中,加用呼末二氧化碳监测对减少低氧血症（RR0.65;95%CI0.56～0.75;P<0.001；I2=3%）效果更明显。呼末二氧化碳监测可以发现更多的呼吸暂停（RR 17.02;95%Cl 6.90～41.99;P<0.001;P69%）但对于其它麻醉并发症如低血压、心动过缓等并无影响。研究结论在胃肠镜检查的镇静中加用呼末二氧化碳监测可以有效发现呼吸暂停,减少低氧血症的发生,尤其对所需麻醉镇静时间较长的胃肠镜操作该保护作用更明显。