南京椴组织培养的研究

本研究以南京椴（Tilia miqucliana）无菌试管苗的茎段、叶片、根系为外植体,进行器官发生研究,探讨了不同因素对南京椴直接器官发生以及愈伤组织诱导的影响。主要结果如下: 1.茎段是南京椴直接器官发生的适宜外植体,最适宜诱导不定芽的培养基为MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.2g·L-1。接种40d后,该培养基能诱导分化出较多的不定芽,且不定芽生长健壮,有利于继代繁殖。适宜增殖培养基为MS+BA0.5-1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.2g·L-1,不定芽能获得较大的增殖系数（4倍以上）。同时,适当降低大量元素浓度（1/2MS）及延长继代周期（40d左右）对不定芽的伸长都有较好的效果。适宜的生根培养基为1/2MS+BA0.1mg·L-1+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g·L-1+琼脂5.2g·L-1+活性炭5g·L-1。不定芽培养40-60d后可形成根,最高生根率达到56.6%,生根质量高并且整个植株生长状况良好、长势旺盛。在根长6-8cm时进行开瓶炼苗5d,移栽至腐殖质土壤,成活率可达80%以上。 2.南京椴愈伤组织的诱导较容易,利用叶片作为外植体诱导出的愈伤组织质量较为理想。适宜的诱导培养基为MS+BA0.1mg·L-1+2,4-D 0.5-1.0mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.2g·L-1,40-50d后能获得大量生长良好的愈伤组织。为使愈伤组织保持旺盛的活力和分化能力,在继代培养中逐渐以NAA代替2,4-D。浓度在0.5-1.0mg·L-1的NAA对南京椴愈伤组织增殖来说较为适宜,愈伤增殖倍数较高且生长状态良好。在培养基中加入5mg·L-1的Vc能够有效控制暗培养条件下产生的褐化现象,但对于光培养条件下的褐化防止尚未找到有效的措施。因时间有限,没有系统地研究南京椴间接器官发生的完整过程,如何促进愈伤组织的分化的诱导有待进一步的深入研究。