自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭中的表达及意义

目的:通过对HBV-ACLF及其他乙肝相关性慢性肝病患者血清自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ表达情况的检测,探讨HBV-ACLF的自噬状态以及自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ与HBV病毒复制及其肝脏疾病严重程度的关系,为HBV-ACLF的治疗及预防提供新思路。方法:收集2016年9月至2017年9月广西医科大学第一附属医院诊治的HBV-ACLF患者20例,以及同期诊治的CHB、LC、HCC患者各20例,体检科健康体检组20例。采集所有研究对象血清,分离提取血清上层血浆,ELISA法检测收集血清中自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ的表达量;检验科收集各患者HBV病毒学指标、生化指标等临床数据,应用相关生物学软件和统计学软件对检测结果进行分析,比较不同乙肝相关性慢性肝病患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ的差异性及其与病毒学、肝脏疾病严重程度的相关性。结果:(1)自噬相关蛋白Beclin1在乙肝相关性慢性肝炎患者和健康人群血清中均有表达,分别表达为HBV-ACLF(11.26 ng/ml±3.51ng/ml)、CHB(8.73ng/ml±2.58ng/ml)、LC(11.21 ng/ml±2.9ng/ml)、HCC(10.19ng/ml±3.33ng/ml)及健康人群(8.16ng/ml±2.51ng/ml)。差异性经组间两两比较分析显示,HBV-ACLF与CHB(P=0.009)、HBV-ACLF与健康组(P=0.001);CHB与HCC(P=0.01)、LC和健康组(P=0.034)以及HCC与健康组(P=0.002)有统计学差异,其余无统计学意义。(2)自噬相关蛋白LC3-Ⅱ亦在乙肝相关性慢性肝炎患者和健康人群血清中均有表达,在HBV-ACLF(67.11 ng/ml±19.46ng/ml)、CHB(60.71ng/ml±19.46ng/ml)、LC(55.01 ng/ml±19.0ng/ml)、HCC(49.74ng/ml±15.4ng/ml)各类患者及健康人群(46.53 ng/ml±17.67ng/ml)中表达水平不同。组间差异性显示,HBV-ACLF与LC(P=0.032)、HBV-ACLF与HCC(P=0.02)、HBV-ACLF与健康组(P=0.00);CHB与HCC(P=0.05)、CHB与健康组(P=0.012)有统计学差异,其余无统计学意义。(3)乙肝相关性慢性肝病各病例组的外周血清HBV-DNA载量分别为CHB(2.92±0.56copy/ml)、LC(3.95±1.18copy/ml)、HBV-ACLF(3.89±1.24copy/ml)和HCC(4.67±1.36copy/ml),差异有统计学意义(P=0.00);组间两两比较:除了HBV-ACLF和LC组之间没有统计学意义,其余均有统计学意义(P<0.05);统计学Spearman相关性分析显示,自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ之间呈正相关性(r=0.29,p=0.03);HBV-DNA载量与自噬相关蛋白Beclin1呈正向线性关系(r=0.42,p=0.02);自噬相关蛋白LC3-Ⅱ也与HBV-DNA载量呈正向线性关系(r=1.95,p=0.04)。(4)Child-Pugh A、B、C各组血清中自噬相关蛋白Beclin1的表达量分别为(8.40ng/ml±2.71ng/ml)、(10.62ng/ml±2.33ng/ml)、(13.46ng/ml±3.12ng/ml);在Child-Pugh分级和Beclin1值中,A、B、C各组的t检验有统计学意义(p<0.05);spearman直线相关性分析显示:Beclin1值与MELD评分之间呈正相关(r=0.494,p=0.001)。(5)Child-Pugh A、B、C各组血清中LC3-Ⅱ的表达量分别为(40.98ng/ml±11.30ng/ml)、(62.30ng/ml±18.10ng/ml)、(70.04ng/ml±16.04ng/ml);在CTP分级和LC3-Ⅱ值中,A、B、C各组的t检验都有统计学意义(p<0.05);LC3-Ⅱ与MELD之间也呈正相关(r=0.529,p=0.00)。结论:(1)在乙肝相关性肝病的发生发展过程中,从肝炎发展到慢加急性肝衰竭的过程中,自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ的表现为逐渐升高的趋势。在HBV-ACLF中自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ表达量最多,自噬处于被激活状态;(2)在CHB、LC、HBV-ACLF和HCC疾病中,随着病情的发展,乙肝病毒复制增多。在HBV-ACLF中,自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ密切相关,而且随着病毒载量越高,自噬蛋白Beclin1和LC3-Ⅱ的表达水平越高;(3)在LC和HBV-ACLF中,随着肝脏疾病严重程度加重,Beclin1和LC3-Ⅱ值均升高;可以认为Beclin1和LC3-Ⅱ与肝脏疾病的发生与发展密切相关。