甘草黄酮高效提取及其分离纯化研究

甘草(Glycyrrhiza L.)是豆科蝶形花亚科多年生草本植物,是我国重要的传统中药,在我国分布广泛,品种齐全,资源丰富,有着重要的药理作用和保健功能。本文以乌拉尔甘草为原料,探索其黄酮的提取和分离工艺,找到了适合黄酮的提取、分离和纯化的工艺条件,并借助现代仪器分析和检测手段对产物进行了成分分析和结构鉴定,为甘草进一步开发利用,为实现甘草资源最大化利用提供科学依据。 首先,对甘草中总黄酮的提取工艺进行研究。采用超声-微波协同萃取技术进行快速提取,在单因素实验的基础上运用正交实验设计方法对其提取工艺进行了优化,得到最优提取条件为:提取时间15min,料液比1∶15,提取温度50℃,乙醇浓度80%,提取次数3次,提取得率为98.80%。同时还运用了冷凝回流提取法和超声波辅助提取法对甘草黄酮进行提取,得到的优化工艺条件分别为:冷凝回流法:提取时间90min,料液比1∶15,提取温度70℃,乙醇浓度80%,提取次数3次,提取得率99.10%;超声波辅助萃取法:提取时间60min,料液比1∶15,提取温度70℃,乙醇浓度80%,提取次数3次,提取得率98.19%。将三种提取工艺进行比较,结果发现,在提取得率相近的情况下,超声-微波萃取法所需的时间大大缩短,显示超声微波协同萃取技术具有低能耗及高效快速的优点,适合于黄酮类化合物的提取。 其次,采用AB-8大孔吸附树脂柱处理甘草乙醇提取物的浓缩浸膏,用乙醇梯度洗脱,得到富集黄酮的组分A。再将组分A用95%的乙醇进行沉淀,获得组分B,经颜色反应、紫外光谱和高效液相色谱分析,确定其为纯度为96%以上的黄酮类物质。最后,为进一步分离出甘草黄酮的单体化合物,采用聚酰胺柱层析分离富集黄酮的组分A,用不同浓度的乙醇梯度洗脱,反复分离最终得到化合物Ⅰ,并通过紫外光谱法和核磁共振法鉴定其结构为甘草苷。