背景与目的:前期研究中,基因、转录、表观遗传、蛋白、代谢等多个方面对的研究表明,阴虚阳虚体质主要存在代谢、神经内分泌、免疫紊乱的微观机制。其中,蛋白的研究较薄弱,主要是对特定功能的相应蛋白进行检测,没有对整体蛋白特征的研究。体质既有稳定性,又有可变性和可调性,基因表达稳定不变,是体质稳定性的基础,而蛋白的动态表达则能较好地反应体质的可变性和可调性;并且,体质的形成是先后天共同作用的结果,基因由先天决定,反应体质的禀赋遗传,蛋白受后天环境等因素的影响,与体质的环境制约论的思想相合。蛋白水平的研究与前期基因的研究相结合,能更好地反应体质的特性和基本原理。本研究检测阴虚阳虚体质的蛋白谱表达,研究阴虚阳虚体质的蛋白特征,以期为体质理论提供现代生物学的客观依据,为区分不同体质的人群提供依据,另外,为进一步研究体质调理提供依据,为体质可调研究提供前期基础。方法:根据中医体质分类与判定标准,纳入阳虚体质、阴虚体质和平和体质受试者各12人,年龄、性别基线可比。采集空腹外周静脉血并分离血清,以TMT质谱技术检测血清蛋白质表达,筛选差异蛋白,根据KEGG数据库、Reactome数据库对差异蛋白进行通路富集,根据Gene Ontology数据库对差异蛋白进行GO富集。查阅文献并结合前期研究几个,挑选差异蛋白以Western Blot技术进行进一步验证。结果:1.以|log2Fc|>0.263且P<0.05为标准,筛选出阳虚体质与平和体质差异蛋白64个,其中上调蛋白35个,下调蛋白29个。对KEGG通路分类分析,代谢通路包括萜类骨架生物合成的上调,内分泌系统通路包括肾素血管紧张素系统的上调,消化系统包括维生素消化吸收、脂肪消化吸收的上调;免疫系统通路包括白细胞跨内皮迁移的下调。另外,Reactome通路富集及GO富集显示其存在代谢及蛋白质代谢,如甘油磷脂分解代谢、血管紧张素原对血管紧张素的代谢、胰岛素样生长因子结合蛋白对胰岛素样生长因子转运和摄取的调节;物质转运,如极低密度脂蛋白生物合成;凝血和细胞周期的异常。2.以|log2Fc|>0.263且P<0.05为标准,筛选出阴虚体质与平和体质差异蛋白100个,其中上调蛋白61个,下调蛋白39个。对KEGG通路分类分析,代谢相关通路包括萜类骨架生物合成的上调和原发性胆汁酸生物合成、肌醇磷酸代谢的下调,内分泌相关通路包括肾素-血管紧张素系统的上调和胰高血糖素信号通路、黑色素、甲状腺激素信号通路的下调,免疫系统包括补体和凝血级联的上调,消化系统相关通路包括维生素消化吸收的上调和胰腺分泌、唾液分泌、胃酸分泌的下调。另外,Reactome通路富集及GO富集显示其存在代谢及蛋白质代谢,如脂质和脂蛋白的代谢、与GPR40结合的脂肪酸调节胰岛素分泌;物质转运,如脂蛋白代谢、极低密度脂蛋白生物合成;凝血通路及细胞周期的异常。3.为研究阴虚体质与阳虚体质的关系,进一步筛选发现,基于|log2Fc|>0.263且P<0.05,在阳虚体质中表达与阴虚体质、平和体质均有统计学差异的蛋白共19个,为阳虚体质特异蛋白;阴虚体质表达与阳虚体质、平和体质均有统计学差异的蛋白共33个,为阴虚体质特异蛋白;有30个蛋白在阴虚体质与平和体质、阳虚体质与平和体质表达均有差异,但在阴虚体质与阳虚体质之间表达无差异,为阴虚阳虚体质的共同蛋白。对三组蛋白进行富集分析。KEGG通路分类分析显示,共同蛋白富集到萜类骨架生物合成等代谢通路,维生素消化吸收、脂肪消化吸收等消化系统通路,肾素-血管紧张素系统等内分泌系统通路。阳虚体质特异蛋白富集到的TGF-β信号通路与糖尿病相关,阴虚体质特异蛋白富集到甲状腺激素信号通路。另外,Reactome通路富集显示,共同蛋白富集到代谢与蛋白代谢通路,如蛋白质的代谢、血管紧张素原对血管紧张素的代谢、胰岛素样生长因子结合蛋白对胰岛素样生长因子转运和摄取的调节;阳虚体质在甘油磷脂分解代谢通路,阴虚体质在过氧化物酶体增殖物激活受体α调节脂质代谢、脂质和脂蛋白的代谢、回收胆汁酸和盐通路,受各自特异蛋白的调控;脂类转运上,尤其是极低密度脂蛋白生物合成通路,在共同蛋白和特异蛋白中均富集到。GO富集显示了类似的结果。4.选取代谢与物质转运相关差异蛋白以Western Blot进行验证,结果显示,PTPRQ在阴虚体质中表达与阳虚体质、平和体质均有统计学差异,GDF6在阳虚体质中表达与阴虚体质、平和体质均有统计学差异,DGAT2在平和体质中表达与阳虚体质、阴虚体质均有统计学差异,但在阴虚阳虚体质之间无统计学差异。选取代谢和内分泌的下游分析G蛋白进行WB检测,发现G蛋白在三种体质之间表达均有统计学差异。结论:阴虚阳虚体质蛋白表达特征表现为代谢与物质转运、内分泌、消化系统、免疫的紊乱,还可能与细胞周期和凝血功能异常相关;阴虚阳虚体质调控机制存在共性,这或许是二者同为虚性体质的共同物质基础;阴虚阳虚体质调控机制各自存在其特异性,这或许是导致二者临床表现寒热各异的原因。
