骨髓单个核细胞Coombs试验阳性血细胞减少患者骨髓红系造血细胞膜靶抗原初步研究

目的了解骨髓单个核细胞Coombs(BMMNC-Coornbs)试验阳性(+)血细胞减少(又称免疫相关性血细胞减少症,IRP)患者骨髓红系造血细胞膜上促红细胞生成素受体(EPOR)表达量与自身抗体(IgG/IgM)的关系,探索自身抗体可能的作用靶点。方法对46例初治IRP患者[15例有核红细胞自身抗体阳性(+)、31例有核红细胞自身抗体阴性(-)]及18名健康对照应用流式细胞术(FCM)检测骨髓红系造血细胞膜上EPOR表达量,分析自身抗体与EPOR表达水平的相关性;反转录(RT)-PCR技术检测EPOR mRNA的表达水平;FCM分选骨髓红系造血细胞后,Western印迹法检测信号转导蛋白Stat5及磷酸化Stat5(P-Stat5)蛋白表达水平以观察EPO/EPOR信号通路是否受抑;利用甘氨酸缓冲液洗脱3例自身抗体IgM强阳性患者骨髓红系造血细胞膜上结合的自身抗体,重新标记后再次检测EPOR的表达水平。结果 (1)IRP患者有核红细胞自身抗体(+)组EPOR表达量为1.6%±0.9%,明显低于自身抗体(-)组(4.6%±4.1%,P<0.01),而后者明显高于健康对照组(2.3%±1.8%,P<0.05)。IRP患者有核红细胞膜上EPOR与自身抗体呈显著负相关(r=-0.543,P=0.000),EPOR(Y)与自身抗体(X)的直线回归方程为:Y=0.040-0.335X。(2)有核红细胞自身抗体(+)组EPOR mRNA表达水平为(0.68±0.14),明显高于自身抗体(-)组(0.55±0.12,P<0.01)和健康对照组(0.58±0.12,P<0.05)。(3)有核红细胞自身抗体(+)组Stat5蛋白表达明显高于健康对照组(1.45±0.94比0.54±0.36),P-Stat5蛋白表达明显低于健康对照组(0.42±0.18比0.85±0.38)(均P<0.05);而自身抗体(-)组Stat5、P-Stat5蛋白表达水平(0.75±0.69、0.70±0.18)与健康对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。(4)应用甘氨酸洗脱液洗脱后自身抗体数量明显减少,而EPOR表达水平明显增高。结论部分IRP患者自身抗体可作用于骨髓红系造血细胞膜上的EPOR,封闭EPOR信号转导,导致红系较早阶段增殖和分化受抑。EPOR可能为自身抗体作用的靶点之一。