共 2 条
重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定
被引：27
作者：
刘新光
梁念慈
马涧泉
机构：
[1] 广东医学院生物化学与分子生物学研究所!湛江
来源：
关键词：
人蛋白激酶CK2β亚基;
表达载体pT7-7;
原核表达;
蛋白质纯化;
酶动力学分析;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q786 [基因的表达];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 .
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