非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化

被引：34

作者：

李宗菊

熊丽

桂敏

李金泽

刘小莉

刘飞虎

机构：

[1] 云南大学生物技术系,云南省农业科学院园艺研究所,云南省农业科学院园艺研究所,云南省农业科学院园艺研究所,云南大学生物技术系,云南大学生物技术系云南昆明,云南昆明,云南昆明,云南昆明,云南昆明,云南昆明

来源：

云南植物研究 | 2004年 / 04期

关键词：

非洲菊; DNA提取; 模板浓度;

D O I：

暂无

中图分类号：

S682.1 [宿根花卉类];

学科分类号：

摘要：

以改良的CTAB法为基础 ,对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化 :在第二次用氯仿异戊醇抽提时 ,加入“PCN”溶液 (0 0 6 75gPVP ,4 5 μl 10 %CTAB +4%NaCl) ,可明显去除多糖 ;在材料研磨时加入化学物质M (0 10 0 0gNa2 SO3 ,0 0 5 0 0gVC)及N (0 0 2 0 0gVE ,0 10 0 0gNa2 B4O7,0 0 2 0 0gPVP ,2 0 0 μlβ -巯基乙醇 ) ,都可去除酚类物质 ,明显提高DNA及ISSR PCR扩增的质量 ,但N的效果稍优于M ;同时加入M、N及“PCN” ,具有明显的优化效果 ,所提 5个样品DNA ,平均A2 6 0 A2 80、A2 6 0 A2 30分别为 1 81、 2 0 2 ,浓度为 0 6 49μg μl,片段大小约为 4 9kb ,ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高 ,表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明 ,所提DNA模板必须稀释 30倍 (浓度为 15～30ng μl时 ) ,才能扩增出清晰的谱带。

引用

页码：439 / 444

页数：6

共 7 条

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