磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记

被引：49

作者：

孙效文

鲁翠云

梁利群

机构：

[1] 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

来源：

水产学报 | 2005年 / 04期

关键词：

磁珠富集; 草鱼; 微卫星分子标记;

D O I：

暂无

中图分类号：

S965.112 [草鱼（鲩）];

学科分类号：

摘要：

磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过该方法分离草鱼的微卫星分子标记。将草鱼(Ctenopharyngodon idella)基因组DNA经Sau3AI酶切,回收纯化400～900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱,PCR扩增放大,再进行克隆和测序,根据微卫星两端的保守序列设计引物,即可得到微卫星分子标记。本研究又通过同位素标记的探针(CA)15进行二次杂交筛选,获得阳性克隆132个,所得到的阳性克隆经测序,86.36%含有微卫星序列,共获得130个微卫星DNA序列。用引物设计软件PrimerPremier5.0设计引物83对。

引用

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页数：5

共 14 条

[1]

分子克隆实验指南.[M].[美]萨姆布鲁克(Sambrook;J·)等著;金冬雁等译.科学出版社.1992,

[2] Use of short microsatellites from database sequences to generate polymorphisms among Lycopersicon esculentum cultivars and accessions of other Lycopersicon species [J].