鸭心苹果酸脱氢酶的分离纯化及酶学性质

取新鲜鸭心,通过匀浆、硫酸铵沉淀、有机溶剂沉淀、DEAE-Sepharose层析以及Superdex-200层析等方法纯化,获得鸭心中所含的两种电泳纯的苹果酸脱氢酶同工酶(c-MDH和m-MDH),并对粗酶液中含量较高的c-MDH进行酶学性质研究。结果表明:c-MDH和m-MDH纯化倍数分别为69.07倍和130.40倍,酶活力回收率分别为25.54%和10.98%,亚基分子质量分别为39.58ku和37.62ku。c-MDH酶学性质研究表明:该酶最适反应温度为55℃,在30℃以下时比较稳定;最适反应pH为7.2,在pH6～9范围内稳定性较好;其对草酰乙酸的K m值为140.93 mol/L;草酸、SDS、Cu2+、Ag+对该酶的抑制作用非常强烈,而Mg2+、K+、Ba2+对该酶表现出明显的激活作用。