嗜肺军团菌微滴式数字PCR检测方法的建立

被引：8

作者：

于纪棉 ^{[1
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李如松 ^{[2
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倪健波 ^{[2
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魏姣姣 ^{[2
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高峰 ^{[3
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王建峰 ^{[2
]}

机构：

[1] 宁波卫生职业技术学院

[2] 宁波出入境检验检疫局

[3] 盐城出入境检验检疫局

来源：

中国卫生检验杂志 | 2017年 / 27卷 / 09期

关键词：

嗜肺军团菌; 微滴式数字PCR; 实时荧光定量PCR; 检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

R440 [];

学科分类号：

100208 ;

摘要：

目的建立嗜肺军团菌微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）检测方法,并与实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR）技术进行比较。方法针对嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,验证其特异性后,用于ddPCR和qPCR。优化ddPCR的退火温度、引物、探针浓度后,比较ddPCR和qPCR灵敏度和重复性,并对模拟样品进行检测。结果用5株非嗜肺军团菌测试特异性,结果表明具有良好的特异性。ddPCR与qPCR对DNA模板的检测限一致（42.6 fg）,模拟样品检出限为300 cfu/ml,ddPCR的线性相关系数（0.999）略优于qPCR（0.982）,ddPCR检测的RSD（0.78%14.06%）均高于qPCR（0.30%1.98%）。结论微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于嗜肺军团菌检测,且可以对基因进行绝对定量。

引用

页码：1233 / 1236+1239 +1239

页数：5

共 16 条

[1] 2009年-2014年五地区公共场所嗜肺军团菌环境污染现况调查 [J].