加味茵陈蒿汤对α-萘异硫氰酸酯诱导的胆汁淤积小鼠肝损伤作用机制研究

目的：探讨加味茵陈蒿汤治疗α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导的胆汁淤积小鼠肝损伤的作用机制。方法：24只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（Normal组）、ANIT造模组（ANIT组）、加味茵陈蒿汤组（JWYCH组）、熊去氧胆酸组（UDCA组），每组6只。Normal组与ANIT组灌胃给予饮用水，持续10 d;JWYCH组灌胃给予加味茵陈蒿颗粒剂水溶液，UDCA组灌胃给予熊去氧胆酸悬液，持续10 d。第7天，小鼠用ANIT油溶液（50 mg/kg）造模。末次给药后，采用全自动生化仪检测小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆汁酸（TBA）及总胆红素（TBiL）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织形态学变化；采用RT-qPCR检测肝组织法尼醇X受体（FXR）、成纤维细胞生长因子15(FGF15)、FGF受体4(FGFR4)mRNA表达；Western blot检测肝组织FGF15、FXR、磷酸化FXR(p-FXR)、FGFR4、外排型转运体[胆盐输出泵（BSEP）、多药耐药相关蛋白2(MRP2)]、摄取型转运体[钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP）、有机阴离子转运多肽2(OATP2)]蛋白表达。结果：血清肝功能生化学指标显示，与Normal组相比，ANIT组ALT、ALP、AST、TBA、TBiL水平明显升高（P<0.05）;JWYCH组和UDCA组ALT、ALP、AST、TBA、TBiL水平明显低于ANIT组（P<0.05）；与UDCA组相比，JWYCH组的TBA水平明显下降（P<0.05）。肝组织病理结果显示，光镜下ANIT组可见胆管内胆栓形成，其汇管区以及胆管周围可见大量炎性细胞浸润，提示造模成功；JWYCH组、UDCA组病理损伤较ANIT组有明显改善。Western blot结果显示，与Normal组比较，ANIT组FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2蛋白表达均明显减少（P<0.05），提示造模成功；与ANIT组比较，JWYCH组和UDCA组FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2蛋白表达明显增加（P<0.05,P<0.01），而NTCP、OATP2表达明显减少（P<0.05）。RT-qPCR结果显示，与Normal组比较，ANIT组小鼠肝组织FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显降低（P<0.05）；与ANIT组比较，UDCA组和JWYCH组FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加（P<0.05）；与UDCA组相比较，JWYCH组FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加（P<0.05）。结论：加味茵陈蒿汤能降低总胆汁酸水平，改善胆汁淤积和肝组织损伤。其作用机制可能是通过上调肝细胞FGF15、FGFR4表达，上调FXR和p-FXR水平，从而下调其下游摄取型转运体（NTCP、OATP2）水平以及上调外排型转运体（BSEP、MRP2）水平。