葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化

被引：68

作者：

张君玉 ^{[1
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郭大龙 ^{[1
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龚莹 ^{[1
]}

刘崇怀 ^{[2
]}

李猛 ^{[1
]}

张国海 ^{[1
]}

机构：

[1] 河南科技大学林学院

[2] 中国农业科学院郑州果树研究所

来源：

果树学报 | 2011年 / 28卷 / 02期

关键词：

葡萄; SCoT; 正交设计; 单因素试验; 体系优化;

D O I：

10.13925/j.cnki.gsxb.2011.02.020

中图分类号：

S663.1 [葡萄];

学科分类号：

090201 [果树学];

摘要：

SCoT标记是一种新型目的基因分子标记方法,采用L16(45)正交试验和单因素试验2种方法优化了葡萄SCoT-PCR反应体系,结果表明正交试验中关键影响因子为dNTPs浓度,单因素试验中为dNTPs和Mg2+浓度。综合2种方法,优化的葡萄SCoT-PCR反应体系为:Mg2+2.0 mmol.L-1、dNTPs 0.3 mmol.L-1、Taq酶1.0 U、引物0.3μmol.L-1、DNA模板30 ng,总体积20μL。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,54℃退火1 min,72℃复性2 min,34个循环;最后72℃延伸8 min。该反应体系在20个葡萄品种的验证中表现出良好的稳定性和可重复性,该反应体系的建立为葡萄种质遗传多样性评价、基因组分析、指纹图谱构建、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段。

引用

页码：209 / 214

页数：6

共 10 条

[1]

Start Codon Targeted (SCoT) Polymorphism: A Simple, Novel DNA Marker Technique for Generating Gene-Targeted Markers in Plants [J].