亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定

被引：13

作者：

王玉荣 ^{[1
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张雪妍 ^{[1
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刘传亮 ^{[1
]}

陈亚娟 ^{[1
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李付广 ^{[1
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机构：

[1] 中国农业科学院棉花研究所/农业部棉花遗传改良重点实验室

[2] 天津科技大学食品工程与生物技术学院

来源：

中国农业科学 | 2009年 / 42卷 / 04期

关键词：

亚洲棉; 全生育期; 均一化; cDNA文库; EST;

D O I：

暂无

中图分类号：

S562 [棉];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

【目的】构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因。【方法】取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期、花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA。用DSN(duplex-specificnuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到λZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库。【结果】初级文库滴度4×106pfu·ml-1,库容2×106个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5kb。随机挑取192个克隆进行EST(expressedsequencetags)测序,冗余度仅为3.49%。BLASTN比对结果显示:78.31%的EST为新EST。【结论】文库均一化效果良好,质量符合要求,可能包含大量新基因,是进行EST测序、发掘新基因等棉花功能基因组学的研究平台。

引用

页码：1158 / 1164

页数：7

共 33 条

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