酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用

被引：6

作者：

龚映雪

台艳

肖文娟

王峻梅

唐根云

全艳彩

刘泽寰

机构：

[1] 暨南大学生命与健康工程研究院

来源：

深圳大学学报(理工版) | 2010年 / 01期

关键词：

基因工程; 可再生能源; 纤维素; 生物转化; 酿酒酵母; 多基因共表达; 绿色木霉; 内切葡聚糖酶; 纤维二糖水解酶;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.

引用

页码：82 / 87

页数：6

共 8 条

[1] 酵母整合型载体的构建及其功能分析 [J].

武志强 ;

贾耐兵 ;

李娜 ;

王瑞菊 ;

马百成 ;

王翠艳 ;

李明刚 .

生物学通报, 2008, (05) :47-50

[2]

酵母高稳定载体的构建及人-αA干扰素在酵母中的高表达和分泌[J]. 霍克克,虞兰兰,陈新杰,李育阳.中国科学（B辑化学生命科学地学）. 1992(09)

[3] Systems for applied gene control in Saccharomyces cerevisiae [J].

Maya, Douglas ;

Quintero, Maria Jose ;

Munoz-Centeno, Maria de la Cruz ;

Chavez, Sebastian .

BIOTECHNOLOGY LETTERS, 2008, 30 (06) :979-987

[4]

Construction of a Recombinant S. cerevisiae Expressing a Fusion Protein and Study on the Effect of Converting Xylose and Glucose to Ethanol[J] . Jinxin Zhang,Shen Tian,Yazhen Zhang,Xiushan Yang.Applied Biochemistry and Biotechnology . 2008 (2)

[5] Establishment of a xylose metabolic pathway in an industrial strain of Saccharomyces cerevisiae [J].

Wang, Y ;

Shi, WL ;

Liu, XY ;

Shen, Y ;

Bao, XM ;

Bai, FW ;

Qu, YB .

BIOTECHNOLOGY LETTERS, 2004, 26 (11) :885-890

[6]

构建重组酿酒酵母表达融合蛋白和转化木糖、葡萄糖生成乙醇的研究. ZhangJ,TianS,ZhangY,等. 应用生物化学和生物技术 . 2008

[7]

Sambrook,J,Fritsch,EF,Maniatis,T. Molecular Cloning: A laboratory Manual . 1989

[8]

Dual luciferase assay system for rapid assessment of gene expression inSaccharomyces cerevisiae. McNabb DS,Reed R,Marciniak RA. Eukaryot Cell . 2005

← 1 →