创伤弧菌PMA RTi-PCR检测技术的建立

被引：8

作者：

张晶

周勇

陶霞

吴新伟

机构：

[1] 广州市疾病预防控制中心微生物检验科

来源：

中国人兽共患病学报 | 2013年 / 29卷 / 01期

关键词：

创伤弧菌; PMA RTi-PCR; 死活细菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R440 [];

学科分类号：

100208 ;

摘要：

目的将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(RTi-PCR)技术相结合,建立以一种快速准确的创伤弧菌检测方法。方法以vvh基因作为检测创伤弧菌的靶基因,用PMA对样品基因组提取进行前处理,抑制该DNA分子的RTi-PCR扩增。结果终浓度为3.0mg/L的PMA可有效抑制死细胞(1×108 CFU/mL)DNA的扩增;当PMA浓度小于或等于5.0mg/L时,对创伤弧菌DNA的扩增没有显著的影响;含有不同比例死活细菌的创伤弧菌混合液RTi-PCR结果表明,PMA RTi-PCR能选择性定量创伤弧菌中的活菌。纯培养创伤弧菌活细胞的检测灵敏度检测极限为2.5×101 CFU/mL,并且Ct值与细胞数的对数呈良好的线性关系,相关系数R2值为0.9982。结论 PMA RTi-PCR是一种快速灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。

引用

页码：54 / 58

页数：5

共 11 条

[1] 细菌活的非可培养状态的分子生物学检测技术研究进展 [J].

李正义 ;

贾俊涛 ;

祝素珍 ;

姜英辉 ;

房保海 ;

雷质文 .

食品科学, 2011, (15) :308-311

[2] 基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞 [J].

祝儒刚 ;

吕淑霞 ;

刘月萍 ;

张良 .

食品科学, 2011, 32 (08) :219-225

[3] PMA与PCR结合的细菌活细胞检测方法 [J].

罗剑飞 ;

林炜铁 ;

郭勇 .

华南理工大学学报(自然科学版), 2010, 38 (09) :142-146

[4] 水产品中致病微生物的快速检测方法 [J].

杨文鸽 ;

孙翠玲 ;

潘云娣 ;

候温甫 .

中国食品学报, 2006, (01) :402-406

[5] 创伤弧菌败血症的临床和流行病学特点 [J].

卢中秋 ;

李秉熙 ;

黄唯佳 ;

程俊彦 ;

周铁丽 .

中国急救医学, 2003, (07) :34-35

[6]

Simultaneous detection and enumeration of viable lactic acid bacteria and bifidobacteria in fermented milk by using propidium monoazide and real-time PCR[J] . Tomás García-Cayuela,Raquel Tabasco,Carmen Peláez,Teresa Requena. International Dairy Journal . 2009 (6)

[7] Development of a quantitative PCR method to differentiate between viable and nonviable bacteria in environmental water samples [J].

Gedalanga, Phillip B. ;

Olson, Betty H. .

APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, 2009, 82 (03) :587-596

[8]

Selective PCR detection of viable Enterobacter sakazakii cells utilizing propidium monoazide or ethidium bromide monoazide[J] . D.‐M.Cawthorn,R.C.Witthuhn. Journal of Applied Microbiology . 2008 (4)

[9]

Comparison of propidium monoazide with ethidium monoazide for differentiation of live vs. dead bacteria by selective removal of DNA from dead cells[J] . Andreas Nocker,Ching-Ying Cheung,Anne K. Camper. Journal of Microbiological Methods . 2006 (2)

[10] Molecular methods for the assessment of bacterial viability [J].

Keer, JT ;

Birch, L .

JOURNAL OF MICROBIOLOGICAL METHODS, 2003, 53 (02) :175-183

← 1 2 →