基于双重微滴数字PCR对转基因玉米Bt11品系定量检测

转基因玉米(Zea mays) Bt11是具有抗虫、耐除草剂的转基因玉米品系,目前缺乏对其进行准确定量的检测方法。微滴数字PCR (droplet digital PCR, ddPCR)是近年来新兴的第三代PCR技术,在转基因产品定量领域具有极大的应用前景。为探索微滴数字PCR在转基因植物成分检测中的应用,解决现行转基因食品标准存在的问题,完善我国转基因食品检测监管体系,本研究基于双重微滴数字PCR平台建立转基因玉米Bt11品系及内源基因定量检测方法。选择玉米内源基因Zein及Bt11品系特异性基因Cry1A(b)作为定量靶标序列,从稳定性、特异性、定量线性范围、定量检测低限及准确性分析等方面综合评价双重微滴数字PCR定量检测转基因玉米Bt11品系的方法。实验结果表明,所建立的方法能够实现转基因玉米Bt11品系特异性序列和内源基因的特异性扩增,该方法稳定性好,单位体系内源和外源基因拷贝数在DNA浓度为0.05～10 ng/μL时呈现良好的线性,相关系数R2为0.999;内源和外源基因的定量低限(limit of quantitation, LOQ)分别为11.14和3.96个拷贝,定量准确度试验结果显示相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)在5.68%～10.31%之间,满足小于25%的要求。本研究建立的转基因玉米Bt11品系双重微滴数字PCR定量检测方法特异性强、稳定性好、准确度高、定量范围广,可用于食品中转基因玉米品系成分的定量检测。