特异性三重PCR快速检测副溶血性弧菌

被引：5

作者：

陈丽萍 ^{[1
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刘忠民 ^{[1
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陈芸 ^{[1
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张继伦 ^{[2
]}

彭云霞 ^{[1
]}

机构：

[1] 云南出入境检验检疫局

[2] 上海出入境检验检疫局

来源：

微生物学通报 | 2014年 / 41卷 / 04期

关键词：

副溶血性弧菌; 三重PCR; gyrase基因; tdh基因; trh基因; 全自动DNA毛细管电泳;

D O I：

10.13344/j.microbiol.china.130259

中图分类号：

Q93-3 [微生物研究与微生物实验];

学科分类号：

摘要：

【目的】建立同时检测副溶血性弧菌gyrase、tdh、trh基因的三重PCR快速检测方法。【方法】将已报道的这3种基因的引物加入一个PCR反应管中,对引物浓度和退火温度进行优化,找到最佳引物比例和扩增条件。通过特异性验证、灵敏度验证以及方法间对比进行方法确认,其PCR产物使用全自动毛细管电泳分析系统进行分析。【结果】仅在91、269、485 bp处分别出现预期DNA扩增条带;纯培养条件下,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×101、6.6×102和6.6×101 CFU/mL;本底干扰物存在时,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×103、6.6×104和6.6×103 CFU/mL;模板DNA浓度检测限为1.36μg/L。检测进境海产品时,检测结果和FDA 2004标准结果一致,且更易辨认和判断。【结论】此检测方法的成功建立,为副溶血性弧菌及携带tdh和/或trh基因的致病性副溶血性弧菌的检测提供了一种准确、高效、便捷的分子技术手段。

引用

页码：764 / 775

页数：12

共 18 条

[1] 双重PCR检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因方法建立与初步应用 [J].