扩增内标在副溶血弧菌多重PCR检测方法中的应用

被引：11

作者：

吕淑霞 ^{[1
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祝儒刚 ^{[1
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刘月萍 ^{[2
]}

张喆 ^{[2
]}

胡英 ^{[4
]}

机构：

[1] 沈阳农业大学食品学院

[2] 沈阳农业大学生物科学技术学院

[3] 辽宁大学轻型产业学院

[4] 辽宁省疾病预防控制中心

来源：

沈阳农业大学学报 | 2010年 / 41卷 / 06期

关键词：

扩增内标对照; 多重PCR; 副溶血弧菌; 特异性; 灵敏度;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS207.4 [食品的微生物检验];

学科分类号：

083201 ;

摘要：

建立扩增内标存在下同时检测副溶血弧菌tlh基因和trh基因的多重PCR方法。以细菌16SrDNA片段为扩增内标对照(internal amplification control,IAC),副溶血弧菌不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)基因tlh和相对耐热直接溶血毒素(thermostable related hemolysin,TRH)基因trh为检测基因,设计引物,并优化多重PCR体系。特异性及灵敏度试验结果表明:该多重PCR体系检测致病性副溶血弧菌表现出极好的特异性。纯培养条件下,扩增内标存在时tlh基因和致病基因trh的检测灵敏度分别为1.3×102 cfu.mL-1和1.3×103 cfu.mL-1;人工污染牡蛎样品,不经富集培养,扩增内标存在时tlh基因和致病基因trh的检测灵敏度分别为2.6×103 cfu.mL-1和2.6×104 cfu.mL-1;经过6h的富集培养,tlh基因和trh基因的检测限均能达到2.6×102 cfu.mL-1。该检测体系特异性强、灵敏度高,并且扩增内标的存在可排除PCR检测致病性副溶血弧菌可能导致的假阴性结果,可提高检测的速度和精准度。

引用

页码：701 / 705

页数：5

共 20 条

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