丹酚酸B对非酒精性脂肪性肝病细胞模型氧化应激的影响

目的通过体外油酸(OA)诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型,给予丹酚酸B(Sal B)干预NAFLD细胞,探讨Sal B对NAFLD细胞氧化应激的影响及其机制。方法将Hep G2细胞分为对照组、模型组(OA)及治疗组(OA+丹酚酸B),CCK8法检测细胞标准生长曲线,筛选OA最佳的药物干预浓度及干预时间;油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况;检测ALT、AST、TG、TC含量;荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的含量; TBA法检测细胞内丙二醛(MDA)含量; RT-qPCR和Western Blot分别检测SOD2及SIRT3的mRNA及蛋白的表达。运用SIRT3过表达质粒上调SIRT3后给予Sal B干预,通过Western Blot筛选转染试剂和质粒的最合适转染比例,并检测SIRT3与SOD2的相对表达量变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果 1 mmol/L 24 h为OA最佳造模浓度及时间。细胞培养上清液中ALT、AST模型组较对照组升高,干预组较模型组降低,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为1240. 075、471. 989,P值均<0. 05)。细胞内TG、TC模型组较对照组升高,干预组较模型组降低,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为97. 530、39. 824,P值均<0. 01)。模型组MDA较对照组升高,干预组较模型组明显降低,3组间比较差异有统计学意义(F=336. 67,P <0. 01)。3组间细胞SIRT3 mRNA及SOD2mRNA表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为119. 35、32. 005,P值均<0. 01),模型组较正常对照组显著降低,干预组较模型组明显升高(P值均<0. 05)。3组细胞SIRT3及SOD2蛋白表达量比较差异均有统计学意义(F值分别67. 093、70. 314,P值均<0. 01),模型组较对照组降低,治疗组较模型组升高(P值均<0. 01)。Western Blot检测转染和(或)加药后SIRT3、SOD2蛋白的表达,4组细胞SIRT3、SOD2蛋白表达量不同,差异均有统计学意义(F值分别为287. 2、179. 8,P值均<0.01),空白质粒+Sal B组以及质粒组较空白质粒组升高,质粒+Sal B组较质粒组升高(P值均<0.05)。结论 Sal B可减轻NAFLD细胞脂质蓄积状态和氧化应激反应,对NAFLD细胞发挥保护作用。