4种致泻大肠埃希氏菌数字PCR检测方法的建立

针对常见致泻大肠埃希氏菌特征基因stx2、escV、lt、pic，研究建立了一套微滴数字PCR(ddPCR)方法。优化了引物探针浓度，退火温度等条件，考察了方法特异性、线性范围、精密度。结果表明，特征基因stx2在2.0～24506.67个拷贝，escV在8.8～24756.67个拷贝，lt在1.63～19990.00个拷贝，pic在1.63～26500.00个拷贝均呈线性关系，线性系数均大于0.99；确定了各基因的定量限(stx2、esc V、lt、pic分别为21个拷贝、20.60个拷贝、21.67个拷贝、27.67个拷贝)；方法精密度小于10%，特异性良好。采用该方法对实际样品进行检测，结果显示，加标样品显示有阳性微滴，而其余样品均未检出阳性微滴，表明建立的数字PCR方法可用于食品中致泻大肠埃希氏菌的检测。该方法可为监管部门对生产牛肉制品、即食生肉制品、生食果蔬制品等重点企业生产环境卫生的检查提供技术支撑，有利于提高我国食品生产中原料、环境及加工过程的卫生水平，防止微生物污染和交叉污染，为食品生产全链条进行食品安全风险防范提供有力保障。