单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因在变铅青链霉菌中的高效表达及其稳定性研究

被引：3

作者：

杨永辉

徐冲

廖军

周慧毓

朱国萍

牛立文

王玉珍

机构：

[1] 中国科学技术大学生命科学学院分子生物学与细胞生物学系!合肥,中国科学技术大学生命科学学院分子生物学与细胞生物学系!合肥,中国科学技术大学生命科学学院分子生物学与细胞生物学系!合肥,中国科学技术大学生命科学学院分子生物学与细胞生物学系!合肥

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2000年 / 01期

关键词：

葡萄糖异构酶; 变铅青链霉菌; 基因高效表达; 遗传稳定性;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.01.016

中图分类号：

Q532+.3 [己糖]; Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071010 ; 081704 ; 071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

通过三步亚克隆 ,将单点突变葡萄糖异构酶 ( GIG1 38P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒p IJ40 83,构建重组表达质粒 p IJ40 83- GI1 .用重组质粒转化变铅青链霉菌 TK54原生质体 ,经硫链丝菌素抗性 ( Th R)筛选 ,获得重组菌株 TK54/p IJ40 83- GI1 .酶活力测定和 SDS- PAGE分析表明 ,GIG1 38P基因在变铅青链霉菌中得到高效表达 ,GI1粗酶液比活力为 1 5U/mg,GI1表达量约占菌体可溶性蛋白的 2 5% .同时也研究了重组质粒的遗传稳定性 .重组菌株在无选择压力条件下经液体连续传代培养 ,GI1比活力和 GI1表达量在 2 0 0 h传代时间中呈平缓下降趋势

引用

页码：77 / 81

页数：5

共 13 条

[1] 链霉菌M1033 D-木糖异构酶的分子克隆 [J].

朱学良 ;

王玉珍 ;

黄震 ;

刘兢 ;

崔涛 ;

董婉治 ;

牛立文 ;

徐洵 .

生物工程学报, 1992, (03) :232-236+310

[2] 7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因序列分析 [J].

王玉珍 ;

黄震 ;

戴新华 ;

刘兢 ;

崔涛 ;

牛立文 ;

王淳 ;

徐洵 ;

不详 .

生物工程学报 , 1994, (02) :118-123

[3] 7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因的启动子活性检测、转录起始点的确定 [J].

杭俊，王玉珍，戴新华，崔涛，牛立文，王淳，徐洵 .

遗传学报, 1995, (03) :239-244

[4]

Sambrook,J.,Fritsch,E. F.,Maniatis,T. Molecular cloning: a laboratory manual . 1989

[5]

Seg-regational stability of p SG5 -derived vector plasmids in continu-ous cultures of Streptomyces lividans66. Roth M,Hoffmeier C,Geuther R,Muth G,Wohlleben W. Biotechnology Letters . 1994

[6]

Streptomyces cloning: useful recombinant DNA systems and a summation of cloned genes. Tomich P K. Antimicrobial Agents and Chemotherapy . 1988

[7]

Review of the Streptomyces lividans/vectorp IJ70 2 system for gene cloning. Gusek T W,Kinsella JE. Critical Reviews in Microbiology . 1992

[8] Crystal structure of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase [J].