丹宁-聚乙二醇法提取纤维素酶的研究

木霉经固态发酵制成纤维素酶湿曲 ,按曲水体积比 1∶5加入 4 0℃去离子水 ,保温 6 0min后 ,过滤获得粗纤维素酶液。在酶活为FPase 2 2 6u/mL的稀酶液中 ,加入丹宁至 5 0g/L时 ,粗酶液中纤维素酶接近完全沉淀下来 ,将沉淀分散于 pH4 6的 0 1mol/L柠檬酸缓冲液中 ,加入分子质量为 6 0 0 0u的聚乙二醇 (PEG)至丹宁含量的 1 6～ 4 0倍 ,酶活回收率达到2 10 %～ 2 4 5 % ,可将纤维素酶浓缩 7～ 8倍。PEG对纤维素酶有激活作用 ,采用丹宁作为纤维素酶的沉淀剂 ,PEG可将纤维素酶从酶 丹宁复合物中解析出来。丹宁、PEG的用量与酶液中的蛋白质含量有关 ,PEG超过解析酶用量的一定范围 ,因激合纤维素酶使酶活回收率超过 10 0 % ,过多PEG会使系统发生相改变 ,从而使酶失活 ,使得酶活回收率急剧降低。