环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究附视频

被引：12

作者：

王瑞娜

周前进

陈炯

机构：

[1] 宁波大学生物与海洋科学系

来源：

中国兽医学报 | 2014年 / 10期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

单核细胞增生李斯特菌; 环介导等温扩增技术; 横向流动试纸条; 特异性; 灵敏度;

D O I：

10.16303/j.cnki.1005-4545.2014.10.013

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

摘要：

将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条检测技术(lateral flow dipstick,LFD)联合,建立了1种可应用于单核细胞增生李斯特菌快速检测的新方法。针对单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计3对引物(其中,上游内引物由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,进行由生物素标记的LAMP扩增反应,并利用LFD对经FITC标记探针杂交的扩增产物完成检测。优化后的LAMP反应条件为65℃反应40min,从细菌基因组DNA提取到LFD结果判断只需90min左右,比常规PCR技术缩短近2h。LAMP-LFD可特异性地检出单核细胞增生李斯特菌,对哈维弧菌等常见弧菌及嗜水气单胞菌等的检测结果为阴性。灵敏性试验表明,LAMP-LFD针对病原纯培养物的检测灵敏度为3.2×101 CFU/mL或0.64CFU/反应,是LAMP检测的10倍,常规PCR检测的100倍;针对人工污染单核细胞增生李斯特菌的原料奶样品的检测灵敏度为1.6×102 CFU/mL或3.2CFU/反应。利用本方法可从采集样品中检测到单核细胞增生李斯特菌,检测结果与传统的细菌分离培养方法结果一致。试验表明,本研究建立的LAMP-LFD技术可特异、准确地应用于单核细胞增生李斯特菌检测,而且灵敏度高、操作简单、检测成本低,有望发展成为单核细胞增生李斯特菌快速检测的有效手段。

引用

页码：1615 / 1621+1633 +1633

页数：8

共 13 条

[1] 快速检测兔支气管败血波氏杆菌环介导等温扩增(LAMP)方法的建立及应用 [J].

李科 ;

刘燕 ;

肖琛闻 ;

韦强 ;

鲍国连 ;

季权安 .

中国兽医学报 , 2013, (07) :1003-1006+1041

[2] 猪圆环病毒2型LAMP检测方法的建立与评价 [J].

史利军 ;

张锦秀 ;

章金刚 ;

李伟 ;

范晓娟 ;

李刚 .

中国兽医学报, 2010, 30 (02) :174-176

[3] H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测技术 [J].

谢青梅 ;

曹永长 ;

张祥斌 ;

李少璃 ;

冀君 ;

马静云 ;

毕英佐 .

中国兽医学报, 2010, 30 (01) :41-46

[4] 宁海地区香鱼弧菌病病原菌鉴定 [J].

李长红 ;

陈炯 ;

史雨红 ;

李明云 .

微生物学报, 2009, 49 (07) :931-937

[5] 单核细胞增多性李斯特菌hlyA基因序列及溶血素活性测定 [J].

谭炳乾 ;

何启盖 ;

肖军 ;

陈焕春 .

中国兽医学报, 2009, (02) :161-165

[6]

Magnetic nano-beads based separation combined with propidium monoazide treatment and multiplex PCR assay for simultaneous detection of viable Salmonella Typhimurium, Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes in food products[J] . Youjun Yang,Feng Xu,Hengyi Xu,Zoraida P. Aguilar,Ruijiang Niu,Yong Yuan,Jichang Sun,Xingyong You,Weihua Lai,Yonghua Xiong,Cuixiang Wan,Hua Wei.Food Microbiology . 2013 (2)

[7]

Prevalence and characterization of antimicrobial resistance of foodborne Listeria monocytogenes isolates in Hebei province of Northern China, 2005–2007[J] . He Yan,Sucharit Basu Neogi,Ziyao Mo,Wenying Guan,Zhixin Shen,Shuhong Zhang,Lin Li,Shinji Yamasaki,Lei Shi,Nanshan Zhong.International Journal of Food Microbiology . 2010 (2)

[8]

Listeria monocytogenes in raw salad vegetables sold at retail level in Malaysia[J] . Jeyaletchumi Ponniah,Tunung Robin,Margaret Selina Paie,Son Radu,Farinazleen Mohammad Ghazali,Cheah Yoke Kqueen,Mitsuaki Nishibuchi,Yoshitsugu Nakaguchi,Pradeep Kumar Malakar.Food Control . 2009 (5)

[9] Molecular cloning of liver angiotensinogen gene in ayu (Plecoglossus altivelis) and mRNA expression changes upon Aeromonas hydrophila infection [J].

Chen, Jiong ;

Shi, Yu H. ;

Li, Ming Y. ;

Ding, Wen C. ;

Niu, He .

FISH & SHELLFISH IMMUNOLOGY, 2008, 24 (05) :659-662

[10]

Rapid and sensitive detection of white spot syndrome virus by loop-mediated isothermal amplification combined with a lateral flow dipstick[J] . Wansadaj Jaroenram,Wansika Kiatpathomchai,Timothy W. Flegel.Molecular and Cellular Probes . 2008 (2)

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