两种方法培养大鼠破骨细胞的比较研究

目的比较分析直接分离培养的Wistar大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)和诱导培养的Wistar大鼠破骨样细胞(osteoclast-likecell,OLC)的形态和功能的差异,为体外药物干预试验奠定基础。方法采用两种培养法,即从新生(24h内)的Wistar大鼠的四肢长骨骨髓腔内壁机械分离成熟OC直接培养和10-8mol/L的1,25(OH)2D3诱导4周龄Wistar大鼠骨髓单核细胞形成OLC的方法,对获得的OC/OLC进行形态和破骨功能观察。结果两种方法都培养出了抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistantacidphosphatase,TRAP)染色阳性的多核细胞,诱导法获得的破骨细胞数量较多(P<0.05)。成熟OC与诱导获得的OLC形态特征相似,但后者在骨片上形成的陷窝较小而浅。结论直接分离培养法可获得骨吸收功能较活跃的OC,但数目较少,适合骨吸收功能分析、破骨迁移黏附、凋亡研究及单细胞分子生物学研究。1,25(OH)2D3诱导鼠骨髓单核细胞形成的OLC数量较多,但骨吸收功能较差,适合用于破骨细胞分化发育过程的研究。