维生素C混合发酵中产酸菌基因文库的构建

在对氧化葡萄糖酸杆菌ＳＣＢ３２９的纯培养方法进行了探索并获得了一定量的纯培养的ＳＣＢ３２９菌体的前提下，用常规方法抽提得到Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ｏｘｙｄａｎｓ　ＳＣＢ３２９染色体ＤＮＡ。选用质粒ｐＫＳ作为载体，该载体具有氨苄抗性以及ｌａｃＺ基因．用限制酶对染色体进行部分消化，将一定范围内的消化片段回收后与载体连接，连接产物转化Ｅ.ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受态细胞，利用蓝白斑特性选出重组子构建ＳＣＢ３２９基因组文库。用低熔点琼脂糖将ＳＣＢ３２９菌体包埋起来，对包埋在凝胶块中的细菌菌体进行细胞裂解、去蛋白等操作，防止染色体因机械剪切作用而断裂，以测出ＳＣＢ３２９染色体的完整长度。本工作为进行菌株改造以及构建以Ｌ－山梨糖为底物发酵产生维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸的基因工程菌株打下基础。