绵毛优若藜冷诱导SSH文库构建研究

被引：8

作者：

张党权 ^{[1
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明付焕 ^{[1
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江平 ^{[2
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樊绍刚 ^{[1
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杨自辉 ^{[3
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邓顺阳 ^{[1
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机构：

[1] 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室

[2] 兰州大学土木工程与力学学院

[3] 甘肃省治沙研究所甘肃省荒漠化防治重点实验室

来源：

中南林业科技大学学报 | 2010年 / 30卷 / 02期

关键词：

绵毛优若藜; 抑制消减杂交文库; 冷胁迫; 抗冻基因; cDNA克隆;

D O I：

10.14067/j.cnki.1673-923x.2010.02.005

中图分类号：

S548 [其他饲料作物];

学科分类号：

090503 ; 0909 ;

摘要：

绵毛优若藜是我国近年成功引种的高抗逆性饲用及防风固沙植物。以常温下的绵毛优若藜叶片和嫩枝为对照组,冷胁迫诱导处理后的叶片和嫩枝为试验组,获得两者高质量mRNA后反转录成cDNA,RsaI消化使其平末端化,试验组cDNA的5’末端连接上2个特异接头,然后分别与过量对照组cDNA进行杂交,把两份杂交样品混合后,与过量的新鲜变性的对照组cDNA过夜杂交,杂交后的混合液稀释后进行第一轮抑制性PCR以选择扩增特异表达的cDNA,然后以第一轮PCR产物为模板用巢式引物进行二次抑制性PCR,获得的富集差异表达cDNA即为绵毛优若藜冷胁迫SSH文库。将SSH文库的cDNA插入到载体中,共获得了362个克隆,为后续绵毛优若藜的抗冻基因克隆与转基因应用奠定了基础。

引用

页码：65 / 69

页数：5

共 20 条

[1] 银杏雌树成熟叶cDNA文库的构建 [J].