转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位

被引：2

作者：

周梦雅

何风霞

张婧

刘玉

虞天一

卢燕来

王璐璐

赵聃

邱文

王迎伟

机构：

[1] 南京医科大学免疫学系

来源：

南京医科大学学报(自然科学版) | 2016年 / 36卷 / 01期

关键词：

生长阻滞和DNA损伤基因45(Gadd45); 激活转录因子3(ATF3); 荧光素酶报告质粒; 启动子活性;

D O I：

暂无

中图分类号：

R692 [肾疾病];

学科分类号：

100221 [泌尿外科学];

摘要：

目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45（growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45）β/γ启动子（全长和截短）荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞（glomerular messangial cells,GMCs）中过表达激活转录因子3（activating transcription factor 3,ATF3）后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响。同时筛选其可能的ATF3结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长（-1 105+236 nt）和Gadd45γ基因启动子全长（-913+72nt）分别插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒（p GL3-Gadd45β/γ-FL）,再将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒（p IRES2/ATF3）共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd45β/γ基因的启动作用。另用生物信息学软件预测Gadd45β/γ基因启动子上ATF3潜在的结合位点,并据此构建4个Gadd45β和3个Gadd45γ基因启动子截短片段的荧光素酶报告质粒。将Gadd45β/γ基因启动子全长和各截短片段的荧光素酶报告质粒与p IRES2/ATF3共转染GMCs,再行荧光素酶活性测定,以筛选ATF3的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠Gadd45β/γ基因启动子（全长和截短）的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别和p IRES2/ATF3共转染GMCs发现,Gadd45β/γ基因启动子活性均显著增加。而将Gadd45β启动子全长及4个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45β-4的启动活性显著低于p GL3-Gadd45β-FL、p GL3-Gadd45β-1、p GL3-Gadd45β-2和p GL3-Gadd45β-3。提示ATF3可能结合在Gadd45β基因启动子的（-146+23 nt）区域。同样,将Gadd45γ启动子全长及3个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45γ-2、p GL3-Gadd45γ-3的启动活性显著低于p GL3-Gadd45γ-FL和p GL3-Gadd45γ-1。提示ATF3可能结合在Gadd45γ基因启动子的（-456-61 nt）区域,且这段区域可能包含1个以上ATF3结合位点。结论:成功构建了大鼠Gadd45β/γ基因启动子全长及各截短片段荧光素酶报告质粒,并初步确定了ATF3在Gadd45β/γ基因启动子上的结合区域。

引用

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共 6 条

[1]

Atf3 negatively regulates Ptgs2/Cox2 expression during acute inflammation.[J].Jason Hellmann;Yunan Tang;Michael J. Zhang;Tsonwin Hai;Aruni Bhatnagar;Sanjay Srivastava;Matthew Spite.Prostaglandins and Other Lipid Mediators.2015,

[2]

Activating transcription factor 3 is overexpressed in human glioma and its knockdown in glioblastoma cells causes growth inhibition both in vitro and in vivo [J].