利用微滴数字PCR分析转基因生物外源基因拷贝数

被引：50

作者：

姜羽

胡佳莹

杨立桃

机构：

[1] 上海交通大学生命科学技术学院

来源：

农业生物技术学报 | 2014年 / 22卷 / 10期

关键词：

微滴数字PCR(ddPCR); 转基因生物(GMOs); 外源基因; 拷贝数;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)是一种基于泊松分布原理的核酸分子绝对定量技术,在核酸分子的绝对计数/定量领域具有极大的应用潜力。本研究基于ddPCR平台,以转基因水稻(Oryza sativa)T1c-19和转人乳铁蛋白基因基因山羊(Capra hircus)134为例,建立了转基因生物(genetically modified organisms,GMOs)外源基因拷贝数分析方法,并比较了其与传统的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Southern blot方法的准确性。实验数据表明,T1c-19的杀虫晶体蛋白基因(insecticidal crystal protein,Cry1C*)在qRT-PCR和ddPCR测定结果比较一致,约为2拷贝,但已报道的Southern blot分析结果为1拷贝;ddPCR对bar基因的分析结果高于qRT-PCR,分别为2.09拷贝和1.51拷贝。转人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,HLF)山羊134在qRT-PCR和ddPCR的分析结果基本一致,均测得含有1拷贝的HLF基因。研究结果表明,微滴数字PCR方法是一种经济、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,灵敏度和准确性高,将会在拷贝数分析中广泛应用。

引用

页码：1298 / 1305

页数：8

共 9 条

[1]

The Development and Standardization of Testing Methods for Genetically Modified Organisms and their Derived Products[J]. Dabing Zhang~* and Jinchao Guo National Center for Molecular Characterization of Genetically Modified Organisms,School of Life Sciences and Technology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China.Journal of Integrative Plant Biology. 2011(07)

[2] 应用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数的新方法 [J].

万艳 ;

李丽玲 ;

陈小佳 .

暨南大学学报(自然科学与医学版), 2009, 30 (03) :310-313

[3] 利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数 [J].

杨立桃 ;

赵志辉 ;

丁嘉羽 ;

张承妹 ;

贾军伟 ;

张大兵 .

中国食品卫生杂志, 2005, (02) :140-144

[4] Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation [J].

Whale, Alexandra S. ;

Huggett, Jim F. ;

Cowen, Simon ;

Speirs, Valerie ;

Shaw, Jacqui ;

Ellison, Stephen ;

Foy, Carole A. ;

Scott, Daniel J. .

NUCLEIC ACIDS RESEARCH, 2012, 40 (11)

[5]

Absolute quantification of genetically modified MON810 maize ( Zea mays L.) by digital polymerase chain reaction[J] . Philippe Corbisier,Somanath Bhat,Lina Partis,Vicki Rui Dan Xie,Kerry R. Emslie.Analytical and Bioanalytical Chemistry . 2010 (6)

[6] Development of insect-resistant transgenic indica rice with a synthetic cry1C* gene [J].

Tang, Wei ;

Chen, Hao ;

Xu, Caiguo ;

Li, Xianghua ;

Lin, Yongjun ;

Zhang, Qifa .

MOLECULAR BREEDING, 2006, 18 (01) :1-10

[7] Estimating the copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR [J].

Litao Yang ;

Jiayu Ding ;

Chengmei Zhang ;

Junwei Jia ;

Haibo Weng ;

Wenxuan Liu ;

Dabing Zhang .

Plant Cell Reports, 2005, 23 :759-763

[8] Estimating number of transgene copies in transgenic rapeseed by real-time PCR assay with HMG I/Y as an endogenous reference gene [J].

Weng, H ;

Pan, AH ;

Yang, LT ;

Zhang, CM ;

Liu, ZL ;

Zhang, DB .

PLANT MOLECULAR BIOLOGY REPORTER, 2004, 22 (03) :289-300

[9]

Transgene‐induced gene silencing in plants[J] . HervéVaucheret,ChristopheBéclin,TalineElmayan,FrankFeuerbach,ChristianGodon,Jean‐BenoitMorel,PhilippeMourrain,Jean‐ChristophePalauqui,SamanthaVernhettes.The Plant Journal . 2001 (6)

← 1 →