鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达

目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础。方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白。结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%。该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21kD,与理论值均相符。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础。