基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究

被引：10

作者：

张琳 ^{[1
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马利 ^{[1
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丁雅苓 ^{[4
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逯茂洋 ^{[5
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胡北侠 ^{[1
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杨少华 ^{[1
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张秀美 ^{[1
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机构：

[1] 山东省农业科学院畜牧兽医研究所

[2] 山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室

[3] 山东农业大学动物科技学院

[4] 齐鲁制药有限公司

[5] 中国农业大学动物医学院

来源：

西北农林科技大学学报(自然科学版) | 2012年 / 40卷 / 10期

关键词：

传染性支气管炎病毒; 环介导等温扩增; 荧光显色; 钙黄绿素;

D O I：

10.13207/j.cnki.jnwafu.2012.10.032

中图分类号：

S858.31 [鸡];

学科分类号：

摘要：

【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒(IBV)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物,通过对反应体系各组分和条件的优化,建立IBV LAMP检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂,对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测,比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法,该方法能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒,比普通PCR方法敏感100倍,而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时,阴阳性样品均有强烈的颜色对比,其中0.05mmol/L钙黄绿素与0.6mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断,其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中,LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBVLAMP检测方法,该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。

引用

页码：38 / 44

页数：7

共 7 条

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