TRPC6在TGF-β1诱导的体外培养肾小球足细胞损伤中的表达及其高表达对nephrin、desmin表达的影响

目的体外研究经典瞬时受体电位通道6(TRPC6)在TGF-β1诱导的肾小球足细胞损伤中的表达变化及其高表达对足细胞nephrin、desmin表达的影响。方法以肾小球足细胞株(MPC5)为研究对象,以不同质量浓度(0、4、8、12 ng/ml)TGF-β1刺激足细胞,干预72 h后用免疫荧光、Real-time PCR、Wstern blot检测TRPC6的分布及m RNA和蛋白表达。再将MPC5细胞分组,应用12 ng/ml TGF-β1处理各组细胞,分别于0、24、48、72 h应用免疫荧光、Real-time PCR、Western blot检测TRPC6的分布及m RNA和蛋白表达。用脂质体法将小鼠TRPC6真核表达载体p EX-3-TRPC6及对照质粒空载体p EX-3-NC转染足细胞,48 h后应用Western blot检测转染后TRPC6蛋白水平评估传染效率;同时应用免疫荧光、Real time RT-PCR及Western印迹方法检测转染后nephrin、desmin分布及表达的变化。结果与正常对照组相比,倒置显微镜下TGF-β1干预后足细胞足突融合、回缩,当TGF-β1增加至16 ng/ml时足突甚至消失。TGF-β1作用能使足细胞TRPC6表达及分布发生变化,当TGF-β1质量浓度为4 ng/ml,干预72 h后与对照组相比TRPC6 m RNA和蛋白含量即升高,但差异无统计学意义,当TGF-β1质量浓度提高到为8、12 ng/ml时TRPC6 m RNA和蛋白含量明显升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。应用12 ng/ml干预24 h,与对照组相比,TRPC6m RNA和蛋白含量即升高,但差异无统计学意义,当干预时间延长至48、72 h时TRPC6 m RNA和蛋白含量明显升高(P<0.05),并呈时间依赖性。p EX-3-TRPC6转染48 h后足细胞TRPC6蛋白表达水平明显增高(P<0.05),nephein分布未发生变化,但表达量在m RNA及蛋白水平分别下降25%及42%左右(P<0.05),desmin分布发生改变,表达量在m RNA及蛋白水平分别升高132%及116%左右(P<0.05)。结论 TGF-β1可诱导足细胞TRPC6分布变化且表达上调,TRPC6高表达可影响nephrin、desmin表达及desmin的分布,这可能是TRPC6参与足细胞损伤的机制之一。