4种食源性致病菌的多重PCR检测方法的建立

目的:建立一种快速、经济、实用的多重PCR方法,能同时检测4种常见致病菌。方法:根据沙门菌的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)、志贺菌的侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen,ipaH)、副溶血性弧菌的属特异性基因(thermolabile hemolysin,tl)和肠致病性大肠埃希菌的微绒毛粘连基因(eaeA)分别设计了4对引物,预计PCR扩增的目的片段依次为284、606、450、891 bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立了快速检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的单管多重PCR方法。结果:含沙门菌42 cfu/g、志贺菌36 cfu/g、副溶血性弧菌116 cfu/g、肠致病性大肠埃希菌91 cfu/g的肉馅样品经过增菌、DNA提取、扩增、电泳,在16～18 h内应用多重PCR体系能够检出。通过对12株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论:初步建立能快速、灵敏、特异地检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的多重PCR体系,可以作为食物中毒病原菌检测的有效方法。